乙酸激酶检测试剂盒供应!
产品说明:
ACK 广泛存在于生物体内,催化乙酸和ATP 生成乙酰磷酸和ADP,是细菌碳代谢和能量代谢的关键酶,尤其
是在古细菌甲烷合成代谢中起着中枢作用。
测定原理如下:(1)ACK 催化乙酸钠和ATP 生成乙酰磷酸和ADP,(2)丙酮酸激酶催化ADP 和PEP 生成ATP
和丙酮酸,(3)乳酸脱氢酶催化丙酮酸和NADH 生成乳酸和NAD+,(4)在340nm 下测定NADH 氧化生成NAD+速
率,即可反映ACK 活性。
台式
离心机、紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量石英比色皿/ 96 孔UV 板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、
冰、蒸馏水。
操作步骤:
一、样品处理:
1、细菌或细胞处理:
收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500 万细菌或细胞加入1mL 提取液,超声波破碎细菌或
细胞(功率20%,超声3 秒,间隔10 秒,重复30 次),15000g,4℃,离心20 分钟,取上清,置冰上待测。
2、组织处理:
称取约0.1g 组织,加入1mL 提取液进行冰浴匀浆;15000g ,4℃,离心20 分钟,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆):直接检测。
二、测定步骤:
1、紫外分光光度计/酶标仪预热30min 以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、将试剂一于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)保温15min。
注意事项:
1、测定过程中样本和所有试剂在冰上放置,以免变性和失活。
2、反应液的温度必须保持37℃或25℃,比色皿测定时可取小烧杯一只装入一定量的37℃或25℃蒸馏水,将此烧
杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。
3、吸光值于1 时,建议稀释后测量,注意计算公式乘以稀释倍数;吸光值小于0.01 时,建议延长反应时间测
量,注意计算公式变化。
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