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发布时间:2017/12/27 10:13:22关注度:756
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪二胺氧化酶(DAO)水平。用纯化的猪二胺氧化酶(DAO)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入二胺氧化酶(DAO),再与HRP标记的二胺氧化酶(DAO)抗 体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的二胺氧化酶(DAO)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标 准曲线计算样品中猪二胺氧化酶(DAO)浓度。
猪二胺氧化酶(DAO)elisa试剂盒的检测原理!
操作步骤
1. 品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
| 320 pg/ml | 5 号品 | 150µl 的原倍品加入 150µl 品稀释液 |
| 160 pg/ml | 4 号品 | 150µl 的 5 号品加入 150µl 品稀释液 |
| 80 pg/ml | 3 号品 | 150µl 的 4 号品加入 150µl 品稀释液 |
| 40 pg/ml | 2 号品 | 150µl 的 3 号品加入 150µl 品稀释液 |
| 20 pg/ml | 1 号品 | 150µl 的 2 号品加入 150µl 品稀释液 |
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl, 然后再加待测样品 10µl(样品终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽 量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此
重复 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。
7. 温育:操作同 3。
8. 洗涤:操作同 5。
9. 显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
10 分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。
猪二胺氧化酶(DAO)elisa试剂盒的检测原理!
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