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发布时间:2017/10/16 13:54:30关注度:781
淀粉酶(AMY或AMS)全称是1,4-α-D-葡聚糖水解酶,催化淀粉及糖原水解,生成葡萄糖、麦芽糖及含有α1,6-糖苷键支链的糊精。淀粉酶主要由胰腺和唾液腺分泌,肺、肝、甲状腺、脂肪等组织亦含有此酶。其测定主要为比色法和速率法。
淀粉酶(ams)elisa试剂盒操作步骤
1.品的稀释:本试剂盒提供原倍品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
240µmol/l 5号品150µl的原倍品加入150µl品稀释液
120µmol/l 4号品150µl的5号品加入150µl品稀释液
60µmol/l 3号品150µl的4号品加入150µl品稀释液
30µmol/l 2号品150µl的3号品加入150µl品稀释液
15µmol/l 1号品150µl的2号品加入150µl品稀释液
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、孔、待测样品孔。在酶标包被板上品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此
重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂a50µl,再加入显色剂b50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15分钟.
10.终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(od值) 。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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