I型胶原氨基端延长肽的检测
发布时间：2017/1/18 11:14:05关注度：958
1、 原理（Test principle） “三明治”法，总检测时间：18 分钟。
第一次孵育：20μ l 标本和一份生物素 抗P1NP 特异性单克隆抗体一起孵育。第二次孵育：在加入链亲和素包被的微粒和一 份钌复合体标记的P1NP 特异性单克隆抗体后，反应形成一“三明治”样抗原 －抗体复合体，复合体在链亲和素和生物素相互作用下形成固相。将反应液吸入检池 中， 检测池中的微粒通过电磁作用吸附在电极表面。 未结合的物质通过ProCell 除去。 在电极上加以一定的电压，使复合体化学发光，用光电倍增器检测发光的强度。
2 样本收集和储存（Specimen Collection ａnd Storage）:
样本类型(sample type)：血清(serum)必须用试管或内有分离胶的试管收集。使用 肝素锂和EDTA-K3 血浆(plasma)。 拒收标本（Specimen rejection） ：严重溶血、脂血、或用叠氮钠防腐标本。 标本用量(volume)：200uL 血清/血浆 储存条件(sample storage conditions)： 在15–25°C可保存24小时；在2－－8°可保存5 天，C在-20°C可保存6个月。样品多可以冻融5次。
3 试剂（Reagent） ：
3.0 稀释材料（dilution material）:
采用罗氏通用稀释液 稀释倍数（dilution times）:1:5 超出检测限度需要稀释的样品， 要重新申请该项目在 Dilution 中指定并指定稀释倍 数( 1:5),.仪器会自动稀释检测 按项目打出结果，作为原始记录加以保留。
3.1 Roche cobas e601 原装试剂。
3.1.1 试剂内组份(components)：
Ⅰ 链霉亲和素包被的微粒 Ⅱ R1 生物素化的抗total P1NP抗体 Ⅲ R2 三联吡啶钌标记的抗total P1NP抗体 Ⅳ 使用说明书，分英语、法语、德语、葡萄牙语、西班牙语各一份。 3.1.2 未随试剂盒提供的组分 STANDARD OPERATION PROCEDURE 总 1 型胶原氨基端延长肽检测作业指导书（2008-03-13） PAGE 4/10K 广州金域医学检验中心 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory KM-SOP0300?363 Edition 3.0 · Elecsystotal P1NP定标液（P1NP CalSet） · Elecsys骨标志物质控品（PreciControl Bone） · Elecsys系统缓冲液（ProCell M） · Elecsys测量池清洗液（CleanCell M） · Elecsys系统缓冲液/测量池清洗液预热杯（PC/CC-Cup） · Elecsys反应杯/吸样头盒(AssayCups/AssayTips Combimagazine M) · Elecsys废物盒(wasteliner) · Elecsys系统清洗液支架(SysClean Adapter M) · Elecsys 系统清洗液（SysClean）
3.2 试剂准备：
将试剂从冰箱中取出并平衡至室温；不同批号的试剂不能混用；新试 剂与前一批号试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可使 用。
4 仪器（Instrument） Roche cobas e601。 ：
4.1 仪器准备（prepare apparatus） ：
使用前确保仪器水通道、液体垃圾通道畅通，保证系统清洗液（SysClean）、测 量池清洗液 （CleanCell M）、反应杯/吸样头盒(AssayCups/AssayTips Combimagazine M)、废物盒(wasteliner)、系统缓冲液（ProCell M）的足够。然后开机，在仪器的 试剂盘中加入所需的试剂。
5 安全防范（Safety Precautions） ：
操作时必须穿戴手套和工作服；工作后的台面应消毒擦洗；用过的加样枪头等耗 材应作为医用垃圾处理；为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露 太长时间；遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品 应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。
6.1 校准品储存和使用(calibration material storage ａnd usage)：
Roche cobas e601 原装校 准品。要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于 2-8℃可稳定到有效 期。Stop using overdue calibration material.use it within expiration date,storage in 2-8℃ 配制（calibration material redissolve） ：用复溶专用加样枪准确吸取 1mL 去离子水 于瓶中，溶解静置 3 小时，混匀并用有盖小头分装 200μ L/个，标明配制日期， 校 准 品 批 号 ， 配 制 人 以 及 有 效 日 期 ， 于 － 20 ℃ 冻 存 备 用 。 Label confecting date ,calibration lot,person who confected, expiration date.then 复溶后校准品成分的稳定性： 保存于（-20）℃，可稳定 2 个月。 6.2 每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册 24 小时以内）标定一次，如再次标定 即根据下列要求：试剂批号改变(Reagent lot changes) 同一批号的试剂盒在分析仪上使用超过 1 个月（28 天） 同一试剂盒在分析仪上使用超过 7 天 根据需要： 如质控数据超过额定的限度。 Recalibration based on quality control problem
6.3 步骤：
当使用新批号试剂之前，都需要对试剂盒进行校准。在校准（clibration） 菜单中编辑校准液的资料， 在两个样本管中分别加入至少 200ul 的 1， 校准品并放到 2 已指定位置的校准架中，放入样本通道中。然后在计算机屏幕上选择 START 项，再 次点击 START 界面中的绿色 START 健。
6.4 结果判断：
仪器会自动提示是否通过校准。如果未通过会有相应的原因解释以及 解决方法的指导。校准后必须及时做质控且须获得通过
6.5 校准周期：
质控在控的情况下一个月内对同批号试剂有效。如果质控值提示有需 要校准时，应重新校准。
7 操作过程（Procedural Steps） ：
7.1 样本准备：
先检查标本是否合格（标本与作业指导书上标本要求是否一致） ，核对 验单上的条码和标本上的条码是否一致，按样本每天唯一号原则进行编号。将带有编 号的标本离心取血清/血浆，将待测物加入相应的样本管。 STANDARD OPERATION PROCEDURE 总 1 型胶原氨基端延长肽检测作业指导书（2008-03-13） PAGE 6/10K 广州金域医学检验中心 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory KM-SOP0300363 Edition 3.0
7.2 取出空样本架，将含有血清/血浆样本管按先后顺序加入样品架中，将样品架推入 样品槽中。 因需要一定量样本做底， 每个样品管至少加入样品 200ul 样本用量 75ul）
7.3 在[WORKLIST]界面中输入实验号，指定 total P1NP 项目。结果出来后，在 [WORKLIST] 菜单中选择需要打印的结果， 打印后作为原始记录加以保留， 并且操作 者要签上名字及操作日期。
7.4 数据联机入系统(send data to LIS)： 计算机：
设备管理→接口管理→点击罗氏全自动化学发光仪→点击开始，出现预处理 窗口→仪器：选择需要传送结果→SEND 传送→回到计算机预处理窗口→传送。
7.5 数据审核(data checkup)：在确保仪器与电脑数据处理系统正常联机的情况下（即 数据传送和接收无中断） ，仔细核对每一个数据有无错误（如：误传、漏传） ，是否与 临床诊断相吻合，如发现异常情况，应仔细核对实验号与样本架号，原始导出结果与 系统结果是否对应等，如有必要，复查该结果。
8 .质量控制（Quality control） ：
室内质控： 使用罗氏骨代谢通用质控品（PC BONE）做质控，每天至少做两个浓度的值。两 个浓度要求符合本项目要求。当质控达不到要求时，分析原因，或重新定标；仍不能 满足要求时，则做期间核查，检查仪器是否正常。室内质控操作过程。提前在仪器内 设定好质控的靶值，SD 值，在 CONTROL 菜单中指定质控架号、申请质控项目，质控品 每管至少 200ul 质控品。 拒绝： P1NP 允许误差 ALE 为 25%，室内质控 CV 为 2.09%（低值） ，2.13%（高值） ， 偏移为（低值）SD=1.52?g/L（高值）SD=18.42g/L 根据公式计算△SEc=（ALE-Bias） /CV-1.65，选择的质控规则为 1-3s,2-2s,R4s,10x，当质控失控时，应按照《室内质量控 制程序》处理。
9 .干扰物质（Interfering Substances） ： 胆红素影响（bilirubin）：样本中胆红素的浓度小于650 mg/L，在实验允许的精密度范 围内对结果没有影响。 溶血影响（hemolysis）：样本中血红蛋白的浓度小于1.8g/dl，在检测允许的精密度范 围内对结果没有影响。 脂血影响（Lipemia）：样本中内脂的浓度小于 2000 mg/dL，在检测允许的精密度范 围内对结果没有影响 生物素影响(biotin): 围内对结果没有影响 。
10. 注意事项（Notices） ：
仅供体外诊断使用(use only for invitro diagnosis) 试剂：2~8℃保存，对其处理应遵守相应的法律规定。 对于所有组分使用的注意事项和预防措施都要将其视为存在传染病原来处理。源 自的原材料全部经过检验，与梅毒、HAV1&2 抗体、HBsAg 和 HCV 抗体无反 应。
11.其他（Others） ：方法学比较或项目的特殊要求等。 样本中生物素的浓度小于 50ng/ml，在检测允许的精密度范
12.临床意义（Clinic meaning） ：
90%以上的骨基质由1型胶原蛋白组成，1型胶原蛋白主要在骨内合成7。1型胶原 蛋白来源于成纤维细胞和造骨细胞合成的1型前胶原蛋白。 1型前胶原蛋白有N（氨基） 和C-（羧基）端延长部分。这些延长部分（前胶原肽）在由前胶原蛋白转化成胶原蛋 过程中被特殊的蛋白酶除去，随后结合形成骨基质。分析测定的延长部分是氨基端， 故P1NP称为1型胶原蛋白氨基端前胶原肽。P1NP是一种特殊的1型胶原蛋白沉积指示 剂，因此可能作为骨形成的标志；有骨代谢疾病存在时，血清总P1NP 浓度显著增加， 而肾功能不全的也可能出现这种现象。同时伴有继发的骨疾病也可能影响总 P1NP 浓度。有骨代谢疾病存在时，血清总P1NP 浓度显著增加，而肾功能不全的 也可能出现这种现象。
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