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技术文章
二抗的选择方法
点击次数：4608 发布时间：2016/7/19 10:48:22
一、关于二抗的介绍：
二抗：广义上是指专门用来和一抗进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗。
检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可以选择，同时在后续试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型和后续检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从以下几方面考虑：
1、一抗的种属来源
二抗应选用与使用的一抗的物种来源，如一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选用抗小鼠的二抗；如一抗是兔血清制备的多抗，则选用抗兔的二抗。
2、一抗的类别亚型
二抗需要与一抗的类别或亚型匹配，通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体，如果一抗是小鼠IgM，那么二抗相应的二抗就应当是抗小鼠IgM。
3、二抗的种属来源
一般来说，不同种属来源与二抗的质量没有必然的联系，来源于山羊的二抗与来源于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别，然而在双标试验中，如果其中一个一抗是山羊来源的，一个是小鼠来源的，则相应的二抗分别要抗山羊和抗小鼠的二抗，这时候，二抗就不能选择山羊或小鼠来源的。
4、二抗的偶联标记
一般来讲，偶联到二抗的探针主要有酶，荧光基团，生物素，金颗粒。选用哪种探针的二抗取决于具体的实验，对于Western blot和ELISA，最常用的二抗是酶标二抗；而细胞或组织标记实验中通常使用荧光基团标记的二抗，免疫组化中也可以使用辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记的二抗。
5、是否血清吸附过
如果您的检测样本室人源的蛋白，一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗就要选择抗小鼠源的二抗，如果对实验特异性要求很高，那么推荐用人血清吸附过的抗小鼠的二抗，这种二抗由于经过人血清吸附而排除了与人源组织可能发生非特异性反应的IgG，因此非特异性结合降低到最低。
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