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土壤脲酶(Solid-Urease,S-UE)测定试剂盒说明书
S-UE能够水解尿素,产生氨和碳酸。土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关。土壤脲酶活性反应了土壤的氮素状况。
测定原理:
利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:甲苯10mL×1瓶,4℃保存;(自备)
试剂二:粉剂×1瓶,临用前加入20mL双蒸水,充分溶解待用,4℃保存;
试剂三:液体65mL×1瓶,4℃保存;
试剂四A液:液体2mL×1瓶,4℃保存;试剂四B液:液体8mL×1瓶,4℃保存;临用前将A液倒入B液中混合,待用;
试剂五:液体5mL×1瓶,4℃保存;
测定步骤:
1 、培养
|
| 测定管 | 对照管 |
| 风干土样(g) | 0.25 | 0.25 |
| 试剂一(μL) | 125 | 125 |
振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置15min
| 试剂二(μL) | 625 |
|
| 双蒸水(μL) |
| 625 |
| 试剂三(μL) | 1250 | 1250 |
混匀,放入37℃水浴培养24h后,10000g常温离心10min,取上清液。
2、将培养结束的上清液稀释10倍(取0.1mL上清液,加入0.9mL双蒸水)。
3、测氨量
|
| 测定管 | 对照管 |
| 稀释后的上清液(μL) | 400 | 400 |
| 试剂四(μL) | 80 | 80 |
| 试剂五(μL) | 60 | 60 |
充分混匀,室温放置20min
| 双蒸水(μL) | 460 | 460 |
混匀,用对照管调零,于578nm处读测定管吸光值A
脲酶活力计算
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0915x +0.0373;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。
单位的定义:24h每g土样中产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
脲酶活力(U /g 土样)=(A-0.0373) ÷0.0915×稀释倍数(10)×反应总体积(2mL)÷样本质量(0.25g)=874×(A-0.0373)
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