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土壤脲酶(Solid-Urease,S-UE)测定试剂盒说明书

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上传时间:2016/5/7 9:09:51

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上 传 者:北京绿源大德生物科技有限公司

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 测定意义:

S-UE能够水解尿素,产生氨和碳酸。土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关。土壤脲酶活性反应了土壤的氮素状况。

测定原理:

利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一:甲苯10mL×1瓶,4℃保存;(自备)

试剂二:粉剂×1瓶,临用前加入20mL双蒸水,充分溶解待用,4℃保存;

试剂三:液体65mL×1瓶,4℃保存;

试剂四A液:液体2mL×1瓶,4℃保存;试剂四B液:液体8mL×1瓶,4℃保存;临用前将A液倒入B液中混合,待用;

试剂五:液体5mL×1瓶,4℃保存;

测定步骤:

1 、培养

 

测定管

对照管

风干土样(g)

0.25

0.25

试剂一(μL)

125

125

振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置15min

试剂二(μL)

625

 

双蒸水(μL)

 

625

试剂三(μL)

1250

1250

混匀,放入37℃水浴培养24h后,10000g常温离心10min,取上清液。

2、将培养结束的上清液稀释10倍(取0.1mL上清液,加入0.9mL双蒸水)。

3、测氨量

 

测定管

对照管

稀释后的上清液(μL)

400

400

试剂四(μL)

80

80

试剂五(μL)

60

60

充分混匀,室温放置20min

双蒸水(μL)

460

460

混匀,用对照管调零,于578nm处读测定管吸光值A

脲酶活力计算

标准条件下测定的回归方程为y = 0.0915x +0.0373;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。

单位的定义:24h每g土样中产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。

脲酶活力(U /g 土样)=(A-0.0373) ÷0.0915×稀释倍数(10)×反应总体积(2mL)÷样本质量(0.25g)=874×(A-0.0373)

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