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更新时间:2026/10/18 7:58:33关注度:542
关键词标签:人表面膜免疫球蛋白A(mIgA)ELISA试剂盒
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名称:人表面膜免疫球蛋白A(mIgA)ELISA试剂盒
规格:48T、96T,可以提供定量和定性。
性状:含试剂+酶联板+覆膜等。
特点:灵敏性高、特异性强、重复性好。
种属类别:人、大鼠、小鼠、植物、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。
检测标本:血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。
人表面膜免疫球蛋白A(mIgA)ELISA试剂盒操作步骤
1. 包被抗原:用包被液将抗原作适当稀释, 一般为1~10μg /孔,每孔加200μl,37℃温育1小时后,4℃冰箱放置16~18小时。
2. 洗涤:倒尽板孔中液体,加满洗涤液,静放三分钟,反复三次,最后将反应板倒置在吸水纸上,使孔中洗涤液流尽。
3. 加封闭液200μl,37℃放置一小时。
4. 洗涤同2。
5. 加被检血清:用稀释液将被检血清作几种稀释,,每孔200μl。同时作稀释液对照。37℃放置2小时。
6. 洗涤同2。
7. 加辣根过氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200μl, 放置37℃ 1小时。
8. 洗涤同2。
9. 加底物:邻苯二胺溶液加200ml,室温暗处10--15分钟。
10. 加终止液:每孔50μl。
11. 观察结果:用酶联免疫检测仪记录490nm读数。
人表面膜免疫球蛋白A(mIgA)ELISA试剂盒各种类型测定时一般需经过以下步骤:ELISA试剂盒固相包被→加待测样品→温育→洗涤+加酶标物→温育→洗涤→加底物→温育一加终止液→比色→判定结果。ELISA操作较繁杂,操作不当将引起较大的误差。在操作中应注意以下5个方面。
1.随着病情的进展或由其他因素影响,某些抗体在机体内的含量发生大幅波动,因此有必要对标本进行预处理,例如对血清标本作适当稀释,或离心分离血脂等。间接法测定中,标本适当稀释还可降低非特异性反应。
2.加样一般使用加液器,在小鼠ELISA试剂盒中一般有4次加样:加标本、加酶结合物、加底物和加终止液。加标本时必须每份标本使用一支移液器吸嘴,以免交叉污染。加酶结合物、底物和终止液时则不需更换吸嘴。
3.在成批手工检测中,还应注意操作时差的影响。加样及混匀时间的差异,使抗原抗体反应和酶促反应时间不一致,对竞争法及定量检测影响很大,对照品不注意可能会导致错误结果或定量不准。
4.洗涤是ELISA操作过程中决定实验成败的一个关键步骤。目的是除去未结合的免疫反应物,终止抗原抗体反应,除去标本中与反应无关的成分、游离的酶标物以及反应过程中吸附于固相载体上的非特异性物质。可用洗板机洗板或手工洗板,前者洗涤质量较好,各反应孔洗涤效果均一,批内、批间差异小,手工洗板应注意控制各孔洗涤效果,差异不宜太大。www.dumabio.com
5.准确判定结果须使用鸡ELISA试剂盒测读仪(酶标仪),比色法判读可选择单波长或双波长,根据反应液颜色的不同选用不同波长的滤光片,以空白孔校零测定反应孔的吸光度值(A值)。酶标仪具有良好的重复性。
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