实验原理

酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的免疫学检测技术，其基本原理是利用抗原与抗体之间的特异性结合反应，通过酶促反应放大信号，检测微量的蛋白质、细胞因子等生物活性物质。ELISA实验中所需的试剂和耗材需满足一定的质量要求，以保证实验结果的准确性和可靠性。

产品包装：盒装

性状：瓶装液体

规格：96T/48T

保存条件：2-8℃

保存期限：6个月

运输条件：2-8℃低温运输，用干冰或者冰袋低温运输。

标本的稀释原则：先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。

标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用15分钟内配制。 如配制150 pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

生物su标记抗体的稀释原则：临用以生物su标记抗体稀释液稀释，稀释根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物su标记抗体加990μl生物su标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用一小时内配制。

辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：临用以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用一小时内配制。

实验步骤

1. 准备：准备好所有试剂、材料和器具。

2. 温育：将包被有特异性抗体的酶标板放入37℃温箱中温育30分钟。

3. 加样：分别向各孔中加入标准品、待测样本，轻轻混匀。

4. 温育：将酶标板放入37℃温箱中继续温育30分钟。

5. 洗涤：清洗酶标板，除去未结合的抗原抗体。

6. 加酶标二抗：向各孔中加入酶标二抗，轻轻混匀。

7. 温育：将酶标板放入37℃温箱中继续温育30分钟。

8. 洗涤：清洗酶标板，除去未结合的酶标二抗。

9. 加底物溶液：向各孔中加入底物溶液，轻轻混匀。

10. 显色：将酶标板放入37℃温箱中继续温育15分钟。

11. 终止：向各孔中加入终止液，混匀。

12. 测量：在450nm波长下测量各孔的光密度值（OD值）。

结果判断:

1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。

2. 推荐使用业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。

实验注意事项

1. 抗原和抗体的储存：应严格按照说明书要求存放抗原和抗体，避免反复冻融和长时间暴露在高温环境中。同时要保证试剂盒未过期，以获得可靠的实验结果。

2. 加样技术：加样时应保证加入的体积准确且不产生气泡，避免加在孔壁的边缘，以免影响与固相表面的接触。加样时应在每孔的旁边放置一个加样对照孔，以监测加样的准确性和重复性。

3. 温育：温育是ELISA实验中的重要步骤，温育时间和温度的控制对于抗原抗体反应的进行和结果的影响至关重要。必须严格按照说明书要求进行温育，并注意保持恒温状态。

4. 洗涤：洗涤是ELISA实验中重要的一步，它可以去除未结合的物质，提高检测的特异性和灵敏度。洗涤时应保证每次洗涤时间充足，并更换洗涤液以保证洗涤效果。同时要避免在洗涤过程中产生气泡，以免影响洗涤效果。

ELISA90分钟一步法的优点

ELISA90分钟一步法的优点主要包括：

1.操作简单：该方法只需要一步操作即可完成，操作过程简单明了，易于掌握。

2.快速：ELISA90分钟一步法可以在短时间内完成，适合于大批量样品的快速检测。

3.特异性高：该方法采用特定的抗体或抗原进行固定和检测，因此具有较高的特异性。

4.灵敏度高：ELISA90分钟一步法具有较高的灵敏度，可以检测出较低浓度的抗原或抗体。

5.重复性好：该方法的重复性较好，结果较为稳定。

6.安全性高：ELISA90分钟一步法不使用放射性同位素等有害物质，因此具有较高的安全性。

需要注意的是，ELISA90分钟一步法也存在一些缺点，例如可能会受到非特异性干扰因素的影响，导致结果不准确。此外，该方法的试剂成本较高，不适合于小规模样品的检测。

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