检测准备工作:

1. 请提20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。

3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为8000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：按照稀释方法图例 标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品：取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。

4. 生物su化抗体工作液：实验计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用15分钟，以生物su化抗体稀释液稀释浓缩生物su化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。

5. 酶结合物工作液：实验计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。

当日使用。

实验原理

1. 抗体或抗原的吸附：将待测抗原或抗体吸附到固相载体上，常用的载体有微孔板、玻璃纤维、聚苯乙烯等。这些载体表面具有特殊的化学基团，能够与待测抗原或抗体特异性结合。

2. 酶标记的抗体或抗原的结合：将酶标记的抗体或抗原与待测抗原或抗体结合，形成酶标记的抗原-抗体复合物。酶标记的抗体或抗原具有高度的特异性和亲和力，能够与待测抗原或抗体形成稳定的复合物。

3. 底物显色反应：当酶标记的抗原-抗体复合物与底物溶液接触时，酶能够催化底物分解，产生颜色变化。通过测量颜色的变化程度，可以判断待测抗原或抗体的浓度。

操作步骤：

1. 加样：设置空白孔、标准孔和待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl。注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。每次实验都应制作标准曲线。如果样品浓度过高，可以用样品稀释液进行稀释，使样品符合试剂盒的检测范围。

2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物su标记抗体工作液 100μl（取1μl生物su标记抗体加99μl生物su标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用一小时内配制），37℃,60分钟。温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

3. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物su标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

4. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

5. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

6. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后15分钟以内进行检测。

注意事项

1. 试剂盒保存于2-8℃，切勿反复冻融或长时间保存于室温。

2. 实验确保所有试剂均已恢复至室温。

3. 加样时注意避免产生气泡。

4. 洗涤时要保证充分洗涤，避免残留物影响实验结果。

5. 底物溶液应避光保存，避免长时间暴露于空气中。

6. 酶标仪应使用450nm波长进行读数，其他波长可能导致误差。

7. 本试剂盒仅用于科研实验和诊断参考，不适用于临床诊断和治疗。

ELISA试剂盒实验数据的计算处理方法

1、拟和曲线：

输入第1行： 浓度值， 如0 10 50 100 400

输入第二行：该浓度下的调整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42

选择这些输入的数据，用插入里的图表按钮，进入图表向导，在“标准类型”中选择“xy散点图”;在“子图表类型”中选择“折线散点图”，按“下一步”;选择“系列产生在行”，按“下一步”;数据标志，可以填写：如数据y轴，OD值;数据x轴，浓度;按下一步，点击完成。可得曲线图。

单击曲线，按右键，选择“添加趋势线”，在类型中，选择多项式;在选项中，选择显示公式，选择显示R平方值。

得到公式和R平方值。

也可以用上面说的方法： 双击图表，把它输入到图表的数据中，就可以拟和曲线。

2、计算浓度：

第1次实验：

标准曲线为：

y = -4E-05x2 + 0.026x

R2 = 0.9745

为例，已知OD值，计算浓度。

由于y = -4E-05x2 + 0.026x，可以得到：

4E-05x2 -0.026x +y=0

ax2 +bx +y=0

结果分析

根据试剂盒提供的标准品浓度及对应的OD值，利用标准品绘制的标准曲线，计算待测样品的浓度。一般采用拟合曲线法或直线回归法进行数据处理，通过计算得到待测样品的浓度。

说明：

1. 由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。

2. 终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的标本备份。

3. 不同批次的同一产品可能会有少许差别，如：检测限、灵敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验操作，网站电子版说明书仅作参考。

4. 只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到佳的检测结果。

公司简介

上海笃玛生物科技有限公司是一家国内合资集科研和生产为一体的业化生物公司。业提供各类进口品牌，研发生产ELISA试剂盒、细胞株、抗体、耗材、培养基等产品，并提供实验外包，技术指导，操作指导，代做实验，代做课题等技术服务。公司拥研发团队、研发平台及现代化的生产基地，生产各类科研用的产品。 我们由衷的感谢海内外科学家、感谢国内外广大科研工作者、学者予以我们鼎力的支持和理解，我们将在未来的工作中，百尺竿头，发挥优势，勇于开拓、自主创新、敢为人先、锲而不舍，在生命科学的道路上，不断进取，奋发努力，瞄准国际生命科学的沿，不断创新研发新产品。为科研工作提供更好、更人性化的服务。

Shanghai Duma Biotechnology Co., Ltd. is a specialized domestic joint venture that integrates scientific research ａnd production. We specialize in providing various imported brands, researching ａnd developing ELISA kits, cell lines, antibodies, consumables, culture media, ａnd other products. We also provide technical services such as experimental outsourcing, technical guidance, operation guidance, ａnd agency experiments ａnd research projects. The company has a world-class R&D team, leading technology, cutting-edge R&D platforms, ａnd modern production bases, producing various scientific research products. We sincerely thank scientists at home ａnd abroad, as well as researchers ａnd scholars at home ａnd abroad for their strong support ａnd understanding. In our future work, we will take full advantage of our strengths, be brave in exploration, independent innovation, dare to be the first, ａnd persevere. On the path of life science, we will continue to strive ａnd strive, aiming at the forefront of international life science, ａnd constantly innovate ａnd develop new products. To provide better ａnd more humane services for scientific research work.

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