样本实验准备

在收集样本都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的样本，及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本，及时分装后冻存在-20℃备用，有条件的，建议⁻⁷0℃冻存备用。标本应避免反复冻融。

液体类标本: 包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

1. 血清：

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

2. 血浆：

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

3. 尿液：

用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

4. 细胞培养上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

5. 培养细胞

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2⁻⁷.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

6. 组织标本

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

实验步骤

1. 抗原包被：将抗原溶液加入到酶标板孔中，包被抗原，使其在孔底形成一层薄膜。

2. 清洗：清洗酶标板，去除未结合的抗原和其他杂质。

3. 阻断：加入阻断液，封闭酶标板孔中的非特异性结合位点，以减少非特异性结合。

4. 清洗：清洗酶标板，去除未结合的阻断液和其他杂质。

5. 加样：加入待测样本，使其与抗原发生特异性结合。

6. 清洗：清洗酶标板，去除未结合的样本和其他杂质。

7. 加酶标抗体：加入酶标记的抗体，使其与特异性结合的样本中的待测物质发生反应。

8. 清洗：清洗酶标板，去除未结合的酶标抗体和其他杂质。

9. 显色反应：加入底物溶液，发生酶催化反应，产生有色产物。

10. 终止反应：加入终止液，停止酶催化反应。

11. 检测：用酶标仪测定各孔的光密度值，记录数据。

试剂盒组成

结果计算方法如下

1.计算阴性对照A值的平均数(NCX )和阳性对照A值的平均数(PCX)。

2.两个平均数的差(P-N)必须大于一个特定的数值，例如0.400，试验才有效。

3.3个阴性对照A值均应≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范围，则弃去，而已另两个阴性对照重新计算NCX；如有两个阴性对照A值超出以上范围，则该次实验无效。

4.阳性判定值按下式计算：阳性判定值=NCX+0.05。

5.标本A值>阳性判定值的为阳性，小于阳性判定值的为阴性。

需要注意的是，试剂盒的常数只适合于该特定条件下，而不是对各种试剂均可通用。

注意事项

1. 实验请仔细阅读本试剂盒的使用说明，确保所有材料、器具和试剂准备齐全。

2. 为实验结果的准确性，请务必遵循实验步骤进行操作，并注意控制实验条件的一致性。

3. 实验过程中请勿触摸酶标板上的酶标抗体区域，以免影响实验结果。

4. 实验结束后请及时清洗并整理实验器具，避免交叉污染。

5. 本试剂盒仅供体外诊断使用，使用请仔细阅读说明书，如有疑问请及时联系厂家或业技术人员。

试剂盒性能

1. 检测范围：1.95 nmol/L –100 nmol/L。

2. 灵敏度：检测浓度小于0.78 nmol/L。

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

合作单位

中国医科大学、复旦大学、北京大学、贵阳医学院、中国农业大学

天津疾控中心、江南大学、山东大学、青岛大学、香港大学

云南省产品质量监督检验研究院

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