小鼠Sestrin 3蛋白 (SESN3) ELISA 试剂盒

产品规格：96T/48T（可拆）

产品数量：咨询

产品应用：ELISA实验

产品货期：现货

有效期：6个月

保存条件：2-8℃

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被相关指标的抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的相关指标呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

准备工作

1.孔板室温平衡1小时

2.做好布板图谱

3.样本解冻

4.准备各型号的移液枪、枪头、量筒

5.准备双蒸水

6.根据样本量配好样本希释液

7.根据样本量及洗板次数配好洗液

8.若需要提设置好振板器、洗板器

9.准备足够量的擦手纸

10.根据说明书提示，溶解标准品

11.配制不同浓度的标准品

12.配制质控品

13.根据预实验结果稀释样本

14.准备好封板膜

实验步骤

1. 抗原包被：将抗原溶液加入到酶标板孔中，包被抗原，使其在孔底形成一层薄膜。

2. 清洗：清洗酶标板，去除未结合的抗原和其他杂质。

3. 阻断：加入阻断液，封闭酶标板孔中的非特异性结合位点，以减少非特异性结合。

4. 清洗：清洗酶标板，去除未结合的阻断液和其他杂质。

5. 加样：加入待测样本，使其与抗原发生特异性结合。

6. 清洗：清洗酶标板，去除未结合的样本和其他杂质。

7. 加酶标抗体：加入酶标记的抗体，使其与特异性结合的样本中的待测物质发生反应。

8. 清洗：清洗酶标板，去除未结合的酶标抗体和其他杂质。

9. 显色反应：加入底物溶液，发生酶催化反应，产生有色产物。

10. 终止反应：加入终止液，停止酶催化反应。

11. 检测：用酶标仪测定各孔的光密度值，记录数据。

注意事项

在进行ELISA检测时，需要注意以下几点：

1. 试剂盒的质量：选择质量可靠、经过认证的试剂盒，避免使用过期或质量不稳定的试剂。

2. 标准化操作：按照试剂盒说明书进行标准化操作，避免操作过程中的人为误差。

3. 避免交叉污染：在实验过程中，要特别注意防止样品和试剂之间的交叉污染，以免影响检测结果的准确性。

4. 温度控制：ELISA检测需要在恒温条件下进行，因此要确保实验过程中温度的稳定和准确性。

5. 空白吸光度值：在实验过程中，要特别注意空白吸光度值的稳定性，避免其对检测结果的影响。

6. 实验数据的处理：对实验数据进行正确的处理和分析，包括对异常值的处理、数据转换等，以确保结果的准确性和可靠性。

7. 质量控制：在实验过程中，应进行必要的质量控制，如定期进行室内质控和室间质评等，以确保实验室检测结果的准确性。

洗板方法

1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5次。

2.自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

结果判断:

1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。

2. 推荐使用业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。

做ELISA标准曲线时需要重点注意的细节问题：

1、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内，包括上限和下限；而对于呈S型的标准曲线，尽量要使实验样品的浓度在中间坡度陡段，即曲线几乎成直线的范围内。

2、检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确性。

3、标准曲线的样品数一般为7个点，但至少要有5个点。

4、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动，但一般来说，相关系数R至少要大于0.98，对于有些实验，至少要0.99甚至是0.999。

5、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的实验结果无从谈起。

6、好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，这样就能够确保标准样品的浓度不会出现较大的偏离。

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