用于 ELISA 实验的样本量一般是多少？

常规单孔加样体积（最常用）

绝大多数商业化 ELISA 试剂盒，样本加样体积为 50~100 μL / 孔，100 μL 是最主流；少数试剂盒采用 50 μL 体系。

注意：这个体积是预处理后的上清样本，不是原始采集样本。

单次检测所需样本量计算

以做复孔（推荐，减少误差）为例：

单孔 100 μL，复孔就需要 200 μL；额外预留20%~50% 余量（用于稀释、复做、复测）。

复孔检测，一般准备 300~400 μL 预处理上清比较稳妥。

不同样本场景细分

血清 / 血浆试剂盒样本孔多为 100 μL / 孔。
例：复孔检测，原始全血一般需要 0.5~1 mL 全血，才能分离出足够血清 / 血浆。

细胞培养上清、BALF、脑脊液、唾液很多微量试剂盒会用 50 μL 体系。这类样本常常靶标浓度低，若浓度偏高还需要预稀释，要多预留样本。脑脊液这类珍贵微量样本优先选小体积试剂盒。

组织匀浆上清、细胞裂解液按试剂盒要求（50/100 μL / 孔），匀浆制备时尽量制备≥300 μL 上清，方便复测与 BCA 总蛋白定量（BCA 还要单独消耗一部分上清）。

尿液、关节滑液低浓度样本可能需要浓缩，要预留浓缩损耗，原始采集量要更大。

重要补充要点

样本稀释会消耗样本如果样本靶标很高，需要稀释（如 1:10、1:100），实际取用原液体积会变少。例如 100 μL 终体积，1:10 稀释，只需要 10 μL 原液 + 90 μL 稀释液。

预实验建议先取少量原液做稀释摸索，避免珍贵样本浪费。

最小样本极限微量试剂盒最低可到 20~50 μL / 孔；但低于 20 μL 体系，加样误差会明显变大，重复性下降，普通实验室不推荐。

实验设计额外消耗除样本孔外，如果要做基质效应、样本平行复测、样本复孔验证，都需要额外样本。珍贵样本（脑脊液、房水）一定要提前规划，优先做预实验。

区分两个概念

原始采集样本：比如收集 1 mL 腹腔灌洗液

检测用上清：离心后取的上清，才是加到酶标板里的样本

快速汇总

常规商品化 ELISA：100 μL / 孔，推荐复孔，准备 300 μL 上清（含余量）；微量试剂盒：50 μL / 孔。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司