ELISA实验常用的酶有哪几种？

ELISA 标记常用酶（两大主流 + 少数备选）

1. 辣根过氧化物酶 HRP（horseradish peroxidase）【最常用】

来源：辣根提取，糖蛋白，分子量～44 kDa

核心底物体系（需要 H₂O₂作为共底物）

TMB：最普及，显色蓝色，硫酸终止变黄，读板450 nm，安全稳定

OPD：橙黄色，492 nm，见光易分解，有潜在毒性

ABTS：绿色，405 nm，适合不终止、动力学读数

优点：分子量小，标记后对抗体活性影响小；价格低、稳定性好，同时支持比色 + 化学发光底物

缺点：样本中内源过氧化物酶易造成背景干扰，需要封闭（H₂O₂预处理样本）

2. 碱性磷酸酶 AP / ALP（Alkaline Phosphatase）【第二常用】

来源：小牛肠黏膜（CIAP）或大肠杆菌

常用底物：pNPP，水解后黄色产物，405 nm读取；也可用化学发光 / 荧光底物，灵敏度更高

特点：碱性条件下活性最佳；内源 AP 干扰一般低于 HRP；底物反应更平缓，信号稳定性强，适合高灵敏度、长孵育实验

缺点：分子更大，标记效率略低于 HRP；缓冲体系 pH 要求偏碱，成本更高

3. β- 半乳糖苷酶 β-Gal（β-galactosidase）【较少用】

来源：大肠杆菌
底物：ONPG，产物黄色，420 nm。多用于双标记免疫实验，常规 ELISA 很少选用，底物选择少，灵敏度一般。

4. 脲酶 Urease（脲素酶）【少见】

分解尿素产氨，改变 pH，依靠指示剂显色；无需酶标仪读吸光值，多用于简易定性，科研常规 ELISA 基本不用。

快速选择要点

普通间接 / 竞争 ELISA、测血清抗体滴度 → HRP-TMB（）

需要更高灵敏度、低背景，化学发光 ELISA → AP 或 HRP 发光底物

双标记多指标联检 → 搭配 HRP+AP 两套酶体系

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司