抗体的体内诱导和检测

抗体的体内诱导和检测

一、抗体体内诱导（动物免疫，在动物体内诱导 B 细胞产生特异性抗体）

1. 基本原理

将抗原导入动物体内，抗原被抗原提呈细胞摄取加工，呈递给 T、B 淋巴细胞；B 细胞活化增殖分化为浆细胞分泌特异性抗体，部分分化为记忆 B 细胞。多次免疫可提升抗体滴度与亲和力。

2. 关键要素

抗原

完全抗原：自带免疫原性（蛋白、多肽、病毒颗粒）；小分子多肽、多糖多为半抗原，需偶联载体蛋白（KLH、BSA、OVA）才具备免疫原性。

抗原纯度越高，非特异性抗体越少；抗原剂量过低免疫应答弱，过高易产生免疫耐受。

佐剂作用：延缓抗原释放、激活固有免疫，显著增强免疫应答。

初免常用：弗氏完全佐剂 CFA（含灭活分枝杆菌，强免疫刺激，仅免疫）

加强免疫：弗氏不完全佐剂 IFA，无分枝杆菌，减少局部炎症

新型佐剂：铝佐剂（温和，适合疫苗）

实验动物选择

兔：多克隆抗体，采血量多，适合制备多抗

小鼠：用于单克隆抗体制备（后续细胞融合）、小量免疫血清获取

山羊 / 绵羊：大量多抗生产

免疫途径

皮下 sc、皮内 id：最常用，佐剂乳化抗原，局部缓慢释放抗原

腹腔 ip：小鼠免疫常用

静脉 iv：可溶性抗原快速免疫，一般不加佐剂

肌肉 im：疫苗常用

免疫程序经典流程：

初次免疫：抗原 + CFA，多点皮下注射

加强免疫（2～3 周间隔）：抗原 + IFA，皮下 / 腹腔，重复 2～4 次

末次冲击免疫：不加佐剂，静脉 / 腹腔注射，3～5 天后采血

采血：眶静脉、耳缘静脉，分离血清即为多抗血清；单抗则取小鼠脾脏做细胞融合。

注意：免疫耐受。抗原过量、免疫年龄过小 / 过大、免疫抑制剂会抑制抗体产生。

二、体内抗体检测（检测动物血清 / 体液中，诱导产生的特异性抗体）

核心目标：有没有抗体、滴度多少、特异性、亲和力，常用方法：

1. ELISA（最常规，初筛 + 测滴度）

间接 ELISA 最常用：包被抗原，加入倍比稀释免疫血清，结合的一抗用酶标记二抗显色。

读取 OD 值，确定终点滴度（OD 高于阴性对照 2.1 倍的最高稀释倍数）

优点：高通量、操作简单；缺点：仅结合抗原，不能区分中和活性。

2. Western blot（WB，验证特异性）

抗原蛋白电泳转膜，孵育免疫血清，检测血清能否识别目标抗原条带。

作用：确认抗体识别蛋白分子量，排除非特异性杂带，验证特异性。

局限：变性抗原，检测的是变性表位，天然构象表位可能检测不到。

3. 免疫荧光 IFA / 免疫组化 IHC

用完整细胞 / 组织切片作为抗原，检测抗体识别天然构象抗原的能力，适合膜蛋白、胞内抗原。

4. 中和试验（功能活性检测，准之一）

病毒 / 毒素中和实验：血清抗体和病毒预孵，再感染细胞，看抗体能否阻断病毒侵染。

测中和抗体滴度，直接反映体内抗体的保护功能，疫苗研发必做。

5. 凝集试验 / 沉淀试验（经典方法）

血凝试验 HA：抗体结合红细胞表面抗原，产生凝集，常用于病毒抗体检测

免疫双扩散：抗原抗体在琼脂扩散形成沉淀线，定性，粗略判断效价

6. 亲和力测定

竞争 ELISA、SPR 表面等离子共振，评估抗体与抗原结合的紧密程度，高亲和力抗体更适合后续应用。

三、体内诱导 vs 体外抗体表达（区分概念）

体内诱导 = 活体动物免疫，B 细胞在动物体内活化产生抗体（多抗 / 用于单抗融合）；
体外抗体表达 = 基因克隆后，细胞（CHO、293、大肠杆菌）体外培养重组表达抗体，不属于体内诱导。

四、常见问题

免疫后测不到抗体：抗原免疫原性差、抗原降解、佐剂失效、免疫耐受、采血时间不对。

ELISA 阳性但 WB 阴性：抗体识别构象表位，SDS 电泳抗原变性后表位丢失。

WB 有条带但中和无活性：识别的表位不是抗原功能位点，抗体仅结合但无中和功能。

如果你需要，我可以单独整理：
① 小鼠 / 兔子免疫标准方案（抗原剂量、采血时间点）
② 间接 ELISA 测免疫血清抗体滴度详细操作流程
或者 ③ 体内诱导抗体的质控评价指标清单。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司