如何避免细胞培养基中双抗加多或加少的情况?

标准工作浓度：青霉素 100 U/mL + 链霉素 100 μg/mL；商品化双抗母液一般是 100×，也就是1 mL 双抗母液加到 99 mL 完全培养基（1% 体积添加）。

一、母液与前期管控（根源减少误差）

优先直接采购商品化 100× 双抗母液尽量不要自己粉末称量配制双抗母液。粉末称量容易出现称量误差，直接造成后续每一批培养基整体偏高或偏低；商品化母液浓度标定好，误差来源更少。

如果必须自己配母液：用分析天平称量，定容后分装冻存，做好浓度标签，每管一次性使用，不要反复冻融。

母液分装，避免反复吸取大瓶母液把 100× 双抗分装成单次使用的小冻存管。配一次培养基拿一管，减少大瓶母液反复开盖、移液带来的吸取错误，同时防止母液污染降解。标记清楚：浓度、配制日期、有效期。

二、配液操作流程上的防错要点

先配完全培养基（基础培养基 + 血清），再加双抗不要先加双抗再加血清和基础培养基。先定好培养基终体积，再按终体积算需要加入的双抗体积。

举例：终体积 500 mL 完全培养基，100× 母液，需要加 5 mL 双抗；先把基础培养基 + 血清补齐到接近 500 mL，补 5 mL 双抗，定容至 500 mL。

严格按终体积计算，不要凭记忆、凭经验 “随便滴一点”很多加多的根源是凭感觉加。每次配液纸上或者记事本写下计算公式：

加入母液体积 = 培养基终体积 ÷ 母液稀释倍数

移液工具校验与操作

使用合适量程移液枪：加几毫升就用 5 mL 或者 10 mL 移液枪；不要用小量程枪多次累加吸取（多次移液会累积移液误差，容易加少或者加多）。

定期校准移液枪；枪头匹配、润洗枪头之后再吸取母液。

禁止在分装好的培养瓶里单独补加双抗❌错误：分装好 49 mL 培养基到各个细胞瓶，再每瓶手动加 0.5 mL 双抗。
每一个瓶子手动加，每一次移液都会引入人为误差，有的瓶多有的瓶少。
✅正确：先在大瓶里把整批完全培养基混匀加好双抗，充分颠倒混匀之后，再分装到各个培养瓶。整瓶混匀之后浓度是均一的。

三、标签与记录，防止后续混淆

配完培养基立刻写标签：标注是否含双抗、双抗稀释倍数（1×）、配制日期。区分【含双抗】和【无抗】两种培养基，瓶子颜色标签或者贴纸区分开，避免换液时拿错。

实验记录本同步记录：培养基终体积、加入双抗母液体积、母液批号。

四、复核与核查手段

配完混匀之后，配液人自己复核一遍体积；条件允许可以第二人简单复核一下添加体积（双人复核，大量配液时尤其推荐）。

预实验质控：新一批配好的含双抗培养基，可以先用容易受链霉素影响的敏感细胞做小规模预培养，观察增殖状态；不适合用来直接上正式代谢实验。

五、习惯层面规避误区

不要主观认为 “多加一点抑菌效果更好”，摒弃多加更保险的想法；双抗只是预防性辅助。

代谢相关实验组，直接制备无双抗批次培养基，从源头避免问题。

剩余含双抗培养基不要随意再补加一次双抗；不要二次追加。

简短 SOP 要点（可直接摘抄）

配制含双抗完全培养基时，先混合基础培养基与血清，根据培养基最终总体积计算 100× 双抗母液添加体积；于大瓶体系内加入母液充分混匀后再分装，禁止分装后逐瓶补加双抗；配制完成做好标签记录；代谢实验使用无抗培养基。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司