细胞培养基中双抗加少了应该如何处理？

培养基双抗加少了，抑菌能力不足，但培养基本身没有细胞毒性，核心风险是潜在细菌污染，并不会直接伤害细胞，处理要分还没接种细胞，以及已经培养细胞两种情况。

还没有接种细胞的培养基，如果发现双抗添加量偏少，可以直接补加双抗储存液，补足到 1× 标准终浓度，混匀之后就可以正常使用。但要留意总体体积，补加的储存液体积很小，一般不会明显改变培养基其他组分浓度。如果培养基已经分装过很多瓶，全部开盖补加反而会引入新的污染风险，这种情况就不要逐瓶补了，优先把这批培养基当做无抗培养基来使用，后续操作进一步强化无菌防护。

已经加到细胞瓶中，细胞正在培养，此时不要再直接往细胞瓶里面补加双抗。直接向培养瓶滴加抗生素，局部瞬间局部浓度过高，容易造成细胞应激损伤。接下来重点加强日常镜检，每天观察培养基是否浑浊、颜色快速变黄，镜下仔细查看有没有游动的细菌小点。后续传代换液的时候，直接换成标准 1× 双抗的新鲜完全培养基就可以。

在这批细胞使用期间，操作上要更加注意无菌，超净台尽量减少开盖时间，枪头、移液管不要交叉污染。同时多留意细胞状态，观察有没有不明原因的生长变慢、细胞碎片异常增多，这些都有可能是隐性细菌亚致死污染的征兆。

如果连续观察两三天，培养基始终清亮，细胞形态和增殖速度都没有异常，就可以继续正常传代培养。一旦发现培养基浑浊，或者镜下看到游动细菌，说明已经发生细菌污染，这瓶细胞直接丢弃，不要尝试补救。

后续实验上的注意点，这批曾经低双抗培养过的细胞，如果后续要做转染、凋亡、信号通路类精细实验，优先确认完全没有隐性污染之后再开展；心里对污染风险存疑的话，复苏一支新的细胞，会更加稳妥。
长期的预防就是配培养基时先算好体积再吸取双抗，尽量不要粗略目测滴加。同时记住双抗只是辅助，就算补到标准浓度，依然无法预防支原体和真菌污染。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司