进行 PCR 实验时，模板 DNA 的浓度过低会有哪些影响？

模板 DNA 浓度过低时，起始拷贝数太少，扩增产物量少，目的条带微弱甚至无扩增条带；实验重复性差，容易出现时有时无的假阴性；扩增容易受体系中抑制剂、移液误差的影响。

详细解释

目的条带浅，甚至完全没有扩增产物起始模板拷贝数不足，经过有限循环扩增后，产物总量很低，琼脂糖电泳看不到清晰条带。

扩增重复性差模板量很少时，移液取样会带来较大随机误差，同一批平行管有的能扩出、有的扩不出，结果不稳定。

更容易受抑制剂干扰少量的 PCR 抑制剂就足以抑制低拷贝模板的扩增；浓度高的模板耐受能力会更强一些。

需要增加循环数来弥补产物量为了获得足够产物，常会提高循环数。循环数增多会带来副作用：非特异性扩增、引物二聚体变多；克隆 PCR 还会累积更多扩增突变。

不适合定量 PCR（qPCR）模板过低会落在 qPCR 检测下限附近，Ct 值波动极大，定量结果不可靠。

✅ 补充对比记忆：

模板过高：杂带多、拖尾、抑制反应、提前进入平台期

模板过低：条带弱、重复性差、易假阴性

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司