进行PCR实验时，模板DNA的浓度过高会有哪些影响?

PCR 抑制效应，扩增效率下降甚至无条带模板中常伴随共纯化杂质（蛋白、酚、多糖、EDTA、盐离子），模板加得多，杂质同步增多，会抑制 DNA 聚合酶活性，导致扩增变弱或完全失败。

非特异性扩增增加，杂带变多模板量太大，引物更容易和模板上的非目标位点发生错配结合，产生大量非特异性条带；电泳背景拖尾严重。

引物二聚体增多过量模板改变体系离子环境，更容易引发引物之间相互配对，引物二聚体条带明显。

产物容易提前进入平台期起始模板拷贝数过高，少数循环后底物（dNTP、酶）就被消耗，扩增很快到达平台，产物不再线性增加，不利于定量；克隆 PCR 还会累积更多突变。

电泳背景高、拖尾严重大量未扩增的模板 DNA 残留在体系中，电泳时会出现大片弥散拖尾，干扰目的条带观察。

影响后续实验（克隆、酶切）多余模板 DNA 会和 PCR 产物竞争连接酶，降低克隆阳性率；残留模板还可能混入后续反应造成污染。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司