如何判断抗体是否可以回收重复使用?

前提：仅无酶标记的 WB 一抗才考虑回收；HRP 标记二抗不建议回收复用；定量 WB 实验不适合抗体回收复用。

步：先做基础条件筛查（回收前）

首先确认孵育条件，只有4 ℃摇床孵育结束后的工作液才可以收集回收；室温长时间孵育过后的抗体直接丢弃，室温环境更容易造成 IgG 变性和细菌滋生。
查看抗体稀释基质，如果只是单纯 TBST 稀释，缺少 BSA 或者脱脂奶粉这类蛋白保护剂，不建议回收；含有 BSA 或者奶粉稳定剂的回收液保存耐受性更好。
查阅产品说明书，若厂家明确标注工作液不可重复使用，则直接放弃回收。
收集之后肉眼观察液体，出现浑浊、絮状沉淀、变色就直接废弃，不再进行后续评估；外观澄清仅为初步合格，不能代表抗体可用。

第二步：阳性质控平行 WB 验证（核心判定步骤）

配制新鲜同批次一抗作为对照组，待评估回收抗体作为实验组。采用同一分装的阳性质控蛋白样品，优先同块胶上样，转膜后剪开分别孵育抗体。封闭、洗涤、二抗、ECL 底物、曝光参数全部固定，不单独给回收组延长曝光补偿信号。
同时评估两项指标：
评估特异性活性，读取目标条带灰度。回收组灰度相较新鲜对照组降幅小于 20‑30%，说明活性保留尚可；如果信号下降超过该阈值，直接报废。
第二评估杂蛋白杂质累积情况，观察整张膜本底、空白泳道以及杂带拖尾。只要回收组背景明显高于新鲜对照组，无论条带信号好坏，直接废弃回收液。
两项指标全部合格，才初步判定这管回收抗体可以继续复用。

第三步：结合保存与复用历史进一步判断

参考经验复用次数仅作为参考，多克隆抗体一般不超过 2‑4 次，单克隆抗体一般不超过 1‑2 次，不能以次数作为放行标准，最终以质控结果为准。
保存状态方面，回收液只适合 4℃短期冷藏；已经经历反复冻融的回收液直接丢弃。补加 0.02‑0.05% 叠氮钠用于抑菌，但叠氮钠无法阻止 Ig

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司