抗体的保存条件对其活性有哪些影响？

抗体本质是免疫球蛋白 IgG，属于球状蛋白质，温度波动、反复冻融、缓冲环境、细菌污染都会破坏它的空间构象；一旦三级结构发生变性，抗原结合位点就会受损，直接造成活性下降甚至完全失活。

先说温度带来的影响。绝大多数液体一抗长期保存推荐‑20℃，短期使用可以 4℃。4℃只适合数周内短期存放，不适合几个月以上长期保存。4℃环境下，蛋白本身虽然不会快速冷冻变性，但溶液里残留的蛋白酶、细菌缓慢增殖，会慢慢降解抗体蛋白，放置越久活性越低。‑20℃可以明显减缓蛋白降解，降低蛋白酶活性。如果放在‑80℃，保存周期还可以进一步拉长，但并不是温度越低就一定越好，关键在于减少冻融，低温只是延缓变质，不能逆转已经发生的蛋白变性。二抗相比普通一抗耐受性略好，但长期也建议‑20℃保存。注意不要把抗体直接放冰箱门位置，冰箱门温度波动大，开关门时反复升降温，会加速抗体变性。

反复冻融是对抗体伤害非常大的因素。冻融过程中，水溶液形成冰晶，冰晶会挤压、撕扯 IgG 蛋白分子；同时局部盐浓度瞬间升高，造成蛋白盐析，蛋白发生聚集。多次冻融之后抗体会形成蛋白聚集体。一部分聚集体会直接丧失抗原结合活性；还有一部分聚集的抗体保留结合能力，但是更容易发生非特异性吸附，后续 WB 实验就会出现莫名杂带、背景升高。分装是解决冻融损伤最有效的手段，收到抗体之后，按照平时单次用量分装成小份，每次只用一管，其余继续冷冻，整支原液就不用反复解冻。

然后是甘油的作用。很多抗体说明书会建议添加 50% 甘油之后‑20℃保存。甘油可以降低溶液冰点，‑20℃条件下不会完全结冰，避免冰晶形成，从根源减少冻融带来的冰晶损伤。加甘油之后‑20℃可以保持液态，每次取用不用冻融。但甘油并不能完全阻止蛋白缓慢氧化降解，加甘油依旧不适合室温长期放置；同时甘油容易长菌，如果开封之后长期 4℃存放，依然会慢慢变质。

接下来是污染的影响。抗体溶液一旦发生微生物污染，细菌分泌的蛋白酶会直接水解 IgG，破坏抗体。外观上会看到液体浑浊、出现絮状沉淀。所以分装的时候尽量无菌操作；部分抗体会添加叠氮钠作为防腐剂。这里需要留意一个重要点，叠氮钠会抑制 HRP 酶活性，如果后续要做 HRP 标记二抗的化学发光 WB，二抗体系不能加高浓度叠氮钠，叠氮钠残留会直接抑制 HRP，造成发光变弱甚至没有信号；一抗里面少量叠氮钠影响很小。

还有光照的影响。抗体尽量避光保存。长期强光照射会造成蛋白氧化，缓慢破坏抗体的氨基酸残基，活性逐步损失，所以存放的离心管尽量避光，不要放在实验台窗边光照处。

另外复溶型的冻干抗体是一类特殊情况。冻干粉末稳定性很高；但是加水复溶之后，稳定性大幅下降，复溶完成后必须立刻分装，按液体抗体条件保存。复溶之后不要再放回冻干状态。复溶后的抗体保质期会明显短于干粉状态。

结合实验结果看保存不当带来的现象。
反复冻融损伤之后，不一定直接完全失活。一部分抗体部分变性，会表现为背景升高，杂带变多；如果变性很严重，就会出现信号减弱，同样的稀释度条带明显变淡，即使调高抗体浓度，信号提升也有限。
长期 4℃存放、细菌蛋白酶降解之后，典型现象就是抗体活性逐步丢失，阳性样品条带越来越弱，背景反而变干净；严重时完全无条带。
光照或者氧化损伤大多属于缓慢的活性衰减，属于慢性失活。

补充实操层面的总结。分装减少冻融是保存抗体最重要的操作；优先‑20℃避光；按需添加甘油；留意防腐剂叠氮钠对 HRP 体系的干扰；尽量避免长期 4℃储存原液。保存条件只能延缓活性衰减，并不能无限期维持抗体活性，即便是保存条件完美，抗体存放多年之后活性依然会缓慢下降。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司