如何判断阳性对照样本的转膜效果是否正常？

阳性对照泳道的转膜好不好，不能只看整张膜，要聚焦这一个泳道，分转膜后丽春红、胶的残留染色、后续 WB 信号三层来判断，同时区分是整体转膜故障还是仅阳性对照泳道局部转膜异常。

1. 丽春红染色（转膜结束立刻检测，最直接的初筛）

转完膜直接用丽春红染膜，观察阳性对照对应的泳道。
首先看这条泳道总蛋白的着色。阳性对照泳道应当可以看到连续、深浅合理的多条蛋白条带，泳道没有大片发白空白，也没有局部缺失缺口。

如果阳性对照泳道丽春红颜色明显比旁边泳道整体很浅：说明该泳道蛋白转移不足，大部分蛋白还留在胶上。

如果泳道里面出现横向空白条纹、局部发白，多半是转膜时胶‑膜之间存在气泡，气泡挡住的位置蛋白无法转到膜上，对应位置后续 WB 就会缺条带。

注意局限：丽春红看得到的是全部总蛋白，看不到特定分子量的靶蛋白有没有转过去。只能确认总体转膜没有发生严重失败，不能证明目标分子量的蛋白已经成功转印。比如大分子量蛋白转膜不充分，其余小分子蛋白转移正常，丽春红不一定能明显分辨出来。

2. 染色原来的胶，看蛋白残留情况

转膜完成之后不要直接丢掉胶，可以用考马斯亮蓝对转印之后的胶进行染色。专门观察阳性对照泳道位置。

转膜效果理想：胶上原本对应的条带明显变淡，大部分蛋白已经离开胶转移到膜上；胶上还剩下很微弱的残留属于正常。

如果胶上阳性对照泳道依旧有很深的蛋白条带，尤其在目的蛋白对应的分子量位置条带很深，说明靶蛋白没有有效转出，转膜不充分。

这个方法对于大分子量蛋白排查非常实用，大蛋白很容易转不完全，丽春红不容易发现，但胶染色可以直观看到残留。

3. 借助内参条带做间接判断（WB 孵育显影之后）

观察阳性对照泳道管家内参的信号。内参蛋白分子量一般偏小，通常比较容易转膜。
阳性对照泳道内参条带清晰完整，没有缺失、没有畸形拖尾，代表这一条泳道小分子蛋白的转印是顺利的。
⚠️这里同样存在局限：内参转过去，不等于大分子量目的蛋白也转过去了。内参分子量偏小更容易转出；如果你的靶蛋白是大分子，即使内参很漂亮，靶蛋白依旧有可能残留在胶里，发生转膜不足。所以内参只能作为辅助佐证，不能当作大分子靶蛋白转膜合格的依据。

4. 阳性对照本身目的条带的显影结果（最终判断依据）

在抗体孵育显影之后看阳性对照的靶蛋白条带形态。
合格转膜：条带边缘锐利，位置符合预期分子量，没有空心、没有局部缺口，条带没有明显向上下弥散拖曳。
异常转膜的几种表现：

条带中间发白空心：转膜过程胶和膜之间有气泡，中间位置蛋白没有转上膜；

条带整体信号偏弱，但样本上样量确认充足，内参信号很好；优先怀疑靶蛋白（尤其大分子）转膜不完全；

条带弥散拉长：有可能转膜电压过高时间过长，蛋白过度转膜甚至穿膜，直接穿过膜流失。

5. 区分两类转膜故障

整一块膜所有泳道信号都弱：属于整体转膜条件问题（电压、时间、缓冲液失效）。
仅仅阳性对照这一个泳道转印异常：多半是上样时该泳道样品析出沉淀、加样孔渗漏，或者这一处胶膜夹层夹入气泡，属于单泳道局部故障。

实操小结流程

转膜后丽春红染色，观察阳性对照泳道总蛋白是否完整，排查气泡造成的局部缺失；

转完的胶用考马斯亮蓝染色，查看目的分子量位置蛋白残留，尤其针对大分子量靶蛋白；

WB 后看该泳道内参作为小分子转膜参考；

最终以阳性对照靶蛋白条带的形态与亮度综合判定转膜效果。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司