平皿孵育法的优缺点是什么？

平皿（细胞培养皿）WB 抗体孵育的优点

首先是取用和操作方便，实验室一般都会常备培养皿，不需要额外购买专用 WB 孵育耗材。打开皿盖就可以直接放置、取出膜，放膜取膜的时候镊子操作空间大，不容易夹破 PVDF 或者 NC 膜。

平铺状态下整张膜可以完全摊开，不会出现卷膜、膜折叠挤压的问题，也就减少了折叠印记这一类人工假象。多张膜分开多个平皿放置，膜之间不会互相接触污染。

放在摇床上摇摆时，皿底平整，抗体溶液流动比较平缓，对于整张膜的抗体浸润相对均匀。比较适合室温短时间孵育二抗，孵育结束洗膜也可以直接就在平皿里面完成，不用来回转移膜。

平皿孵育的缺点

密封性是最大短板。培养皿的盖子只是简单盖合，没有锁扣和密封结构，水汽很容易散失。因此非常不建议直接用于 4℃一抗过夜孵育，冰箱内长时间放置水分持续蒸发，液面下降之后膜边缘很容易暴露风干，留下顽固的背景脏痕。

抗体消耗量偏大。平皿底面积大，想要让液体完全没过整张膜，需要加入比较多的抗体稀释液，对于珍贵、浓度低的一抗来说会造成试剂浪费。

摇床晃动的时候有一个隐患，当转速稍微偏高，液体会往皿的侧壁涌动，膜的上缘短暂露出液面，发生间歇式干湿交替，会在条带外围形成一圈灰色的边缘背景。

皿盖内侧会冷凝水珠，冷凝的水滴有可能重新滴落到膜上，局部稀释抗体，造成局部条带信号不均一。

即便在皿内角落放置湿滤纸来提高皿内湿度，也只能有限减缓蒸发，并不能解决密封差的问题，加湿手段不足以支撑过夜长时间孵育。

适用场景与不适用场景

适合：室温二抗短时间孵育，几十分钟到两小时以内；尺寸偏大的整张膜，不想卷膜也不想用孵育盒的时候；也可以用来做封闭以及 TBST 洗膜步骤。

不适合：4℃一抗过夜孵育；节约抗体的需求；低液面少量抗体的孵育。

使用平皿孵育的实操注意点

尽量加大抗体液体体积，保证液面高度足够；摇床转速调至很低；尽量缩短孵育时长；优先用于二抗；不要直接拿平皿过夜放冰箱。如果确实不得已要用平皿过夜，整个平皿外部用封口膜缠绕一圈封闭皿盖缝隙，同时皿内放置湿滤纸辅助保湿，但依旧要承担一定干膜风险。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司