抗体孵育过程中如何避免膜干燥？

抗体孵育的时候一旦发生膜局部干燥，损伤是不可逆的，后续再怎么洗膜都消除不掉斑痕和脏背景，所以全部以预防为主。

先说孵育盒的使用，这也是平时最常用的方式。孵育液的体积一定要充足，不能只是刚好没过膜，建议加到膜体积的五到八倍，保证摇床晃动的全过程里整张膜都能够浸在液面下面。NC 膜比较容易漂浮，PVDF 膜大多沉在盒底，两种膜都要留意液面高度。盖子扣紧之后，如果是要四度过夜孵育，再拿封口膜缠绕包裹孵育盒的接缝位置，减少水汽向外挥发，注意不要直接拿封口膜封在液体表面，只封闭盒子的缝隙就可以。摇床选用低速轻柔摇摆，转速维持在三十到五十转每分钟就足够，转速过高会把液体甩到盒壁，让膜的上缘反复露出液面，出现边缘一圈脏印。多张膜孵育的时候，每一张膜单独占一格，千万不要互相叠放在一起，膜与膜挤压之后夹层位置的液体被挤开，就会出现隐性的局部干膜。

再讲塑封袋孵育，这种方式可以节省一抗，但也是干膜问题最高发的做法。袋里面的抗体溶液不能只留薄薄一层，需要保留少量富余的液体。排气的时候不要把袋子压得太紧，如果压得完全紧实，一旦出现轻微漏气就会很快吹干膜。封口优先使用热塑封机封牢三边，普通的自封袋不建议直接用来四度过夜，冰箱环境下自封条容易松动漏气。袋子要平放在摇床上，不要竖直立放，竖直放置液体会全部流到袋子底部，膜的上半部分直接悬空暴露。同时尽量排干净袋内的大气泡，如果气泡紧贴在膜表面，气泡覆盖的位置接触不到抗体溶液，后续显影就会出现圆形的斑点痕迹。

四度过夜孵育还有一些冰箱环境上的细节。孵育盒或者塑封袋不要直接对着冰箱冷风机的出风口摆放，风口的气流会明显加速水汽挥发，尽量放在冰箱中层的位置。孵育期间尽量不要频繁开盖拿出来查看，反复开盖带来冷热交换，会加快盒里面水分的流失。也可以在孵育盒的外面底部垫一张湿润的滤纸，注意滤纸只是垫在盒子外面，不能浸入孵育液，以此稍微提升周边小环境的湿度，辅助降低蒸发速度。

如果孵育之后已经看到膜局部有发干发白的区域，这种损伤没有补救办法，后续洗膜无法修复，不要继续往下做二抗和显影，建议直接舍弃重孵或者重新跑胶转膜。

总的实操思路就是保证孵育液体足量，做好容器的密封，摇床选择低速轻摇，放置的时候避开冰箱的冷风出口。过夜孵育优先使用缠好封口膜的孵育盒，如果想要节省抗体选用塑封袋就要格外留意排气和密封，自封袋尽量不要过夜使用，全程保证膜完整浸泡在抗体溶液当中，没有气泡贴附在膜面上。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司