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溶酶体关联膜蛋白2(LAMP2)检测试剂盒使用说明书
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上传时间：2017/3/27 11:29:11
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上 传 者：上海邦景实业有限公司
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溶酶体关联膜蛋白2(LAMP2)检测试剂盒样品收集、处理及保存
1.细胞培养上清：适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液，以1000×g离心15分钟，收集上清。
2.细胞：用PBS反复洗涤细胞3次，调整细胞浓度达到104-106
/ml 左右，通过反复冻融，使细胞破坏并放出细胞内成份，或
者细胞超声粉碎，离心取上清液检测。
3.血清：在室温下，血液自然凝固，以1000×g离心15分钟，取上清待测。
4.血浆：应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合后静置10-20 分钟后，以1000×g离心15分钟，收集上
清。
5.体液：包括胸腹水、脑脊液，分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集，以1000×g离心15分钟，收集上清。
6.组织标本：切取组织标本，称取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或匀浆器，或超声破碎仪将标本匀浆，以2000-3000
rmp离心20 分钟，收集上清进行检测。
7.样品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
8.保存：如果样品不能立即检测，应将其分装，-70 ℃保存，避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀，应再次离心。血液标
本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解
冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
数据计算
1.绘制标准曲线：各标准品 OD 值减去底色即减去空白孔 OD 值，以 6 个标准品的 OD 值为纵坐标 y，以标准品的浓度为横坐标 x，绘制曲线图，并计算出回归方程 y=ax+b。
2.将待测样品的 OD 值代入方程式，计算各组样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际 IFN-γ浓度。
3.敏感度：1.0ng/L
注意事项：
1.实验操作中必须使用一次性吸头，避免交叉污染。
2.加样：加样时，要控制加样速度，避免第一孔与最后一孔间的时间间隔过大，
否则将会导致不同的预孵育时间，从而影响实验的准确性以及重复性。
3.孵育：严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。
4.反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化，如果颜色较深，请提前加入终止液终止反应。
5.建议实验前预测样品含量，如样品浓度过高，应对样品进行稀释，计算结果时乘以相应的稀释倍数。
6.建议使用本试剂盒时先做预实验（即先做标准曲线，试用几个标本），如果对本试剂盒有任何疑问，可和所购经销商联系，
如果因运输过程导致试剂盒失效，可要求调换，但概不承担产品本身以外的任何损失。
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