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CA125,卵巢癌抗原抗体
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价格：￥电议
更新日期：2026/7/21 11:08:47
生 产 地：美洲
产品型号：
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详细内容
卵巢癌抗原抗体应用领域
产品规格：0.2ml/0.1ml
产品产地：美国
产品应用：科研
产品商标：Abcam Santa
产品批次：最新批次进口
产品价格：优惠价格来电咨询
抗体来源：详询种属
适应物种：可提供抗体的各种标记
使用范围：仅限科研使用，不使用与临床
详细资料：参考产品详询说明
操作流程
卵巢癌抗原抗体原位检测技术操作步骤
免疫组织化学（IHC）和免疫细胞化学（ICC）是常用来在原位检测组织和细胞内蛋白表达和定位的两种方法。两种方法主要在样品制备上有所不同；IHC是在固定的整个组织切片上进行，而ICC是在从基质中分离出来的细胞中进行（例如，血液细胞可通过细胞离心涂片法，培养的细胞可在玻片上的长成单细胞层）。
图 . 免疫组织化学技术的流程示意图及代表性结果图。
用抗体标记小鼠肌间神经节，并通过激光共聚焦显微镜成像。绿色，酪氨酸羟化酶标记。蓝色，自发荧光。在知识共享协议的许可下由Swharden发布。
免疫细胞化学的一个变化是在细胞免疫印迹法（in-cell Western: ICW） [8] 。在ICW实验中，长在多孔板细胞需经过和免疫细胞化学相同方式的固定处理， 然后和一抗反应。 一抗或二抗通常与近红外荧光分子轭联 （如DyLight® 680或800），以避免细胞和多孔板的自发荧光。每个孔中的信号再与另一具有不同的发射波长的近红外染料如DRAQ5 [9, 10] 进行标准化。ICW仅可以使用已被免疫细胞化学验证的抗体（注意：不是免疫印迹）， 这样才能确保抗体和检测的特异性。
固定方法
用于IHC或ICC技术的有几种常见的组织或细胞固定方法，固定方法的选择取决于检测分析的类型。用免疫组织化学检测的完整组织样本固定通常用甲醛，这是一种半可逆交联剂，来源于多聚甲醛，也可进一步稀释为福尔马林。虽有研究指出，在甲醛中过分固定会对样品产生负面影响，但其他也有报道称，并无负面影响，反而强调没有充分的固定时间将影响甲醛交联细胞蛋白质。用甲醛固定组织样本甚至是整个动物样本，是将其完全浸没至体积比为4%的工作浓度的甲醛溶液中去。
醇类，特别是甲醇和乙醇，经常用于免疫细胞化学技术中的细胞固定，因为它们不会损伤细胞中的DNA。醇类一般不推荐用于固体组织标本，因为不能像甲醛那样可以保留组织形态。此外，用醇类固定可导致组织发生收缩。丙酮不是常用的固定剂，一般只是用于快速冷冻组织的固定，因为它改善表位的检测，也因此用于甲醇固定后的第二步固定。但是丙酮固定也能导致组织收缩。最后需要指出，在所有的固定方法中蛋白抗原性的保存必不可少，组织标本可以保存在液态氮冷却过的异戊烷中，并存储在80ºC直到后续处理。
方法 使用范围 利与弊
甲醛类 完整组织
简单且经济
改善了标本的持久性
可能会破坏一些抗原表位 (见表位回复部分)
醇类 细胞（免疫细胞化学）
在样品中不会交联DNA
不推荐用于组织标本的固定，因为不能保持粗组织形态
可能会引起组织收缩
丙酮 冰冻组织或甲醇固定后的再固定
比单独用快速冷冻固定效果更好
可能会引起组织收缩
快速冷冻 需要保存抗原表位
快速有效地保存了抗原表位
必须保持组织一直处于冷冻状态，产生了长期储存的问题
表三：免疫组织化学固定方法。
包埋方法
组织在切片和染色前，必须先包埋到某种基质中。石蜡是常用来包埋组织的。由于石蜡是疏水的，所以组织必须在一系列浓度梯度增高的乙醇中浸泡进行脱水。在灌注石蜡前的倒数第二步是把组织标本浸泡在二甲苯中使其完全脱水。在组织灌注石蜡后的短时间后，把它们放入（通常在一个小塑料盒内）65%石蜡浴，然后再放入一个模具中，最后凝固成小块，可经切片机切片。石蜡包埋法因其简单、成本低、样品保存持久、可行性高，因此很受欢迎。但石蜡包埋法也有缺点，即无法切的很薄（小于5微米）。为了能在高分辨率的光学显微镜和电子显微镜下观察切片，选择塑料包埋更好，因为可以切出很薄的组织切片，而且有助于保留组织形态。此外，塑料还可以成功包埋非常坚硬的组织（如骨）并切片。然而塑料包埋并不常用，因其比石蜡更昂贵，且会干扰组织染色。先前已冰冻的组织可以用最佳切片温度复合物（OCT）包埋，这是一种水溶性聚乙二醇树脂溶液。用OCT包埋残留少，从而背景信号低，所以是冷冻组织免疫组化染色的理想选择。OCT包埋的一个明显缺点就是在冰冻时变得不透明，在冰冻组织切片时定位较难。
方法 适用范围 利与弊
石蜡 甲醛固定组织
简易、可行性高
组织可以长期保存
质地较软，切片难以很薄
需要固定，可能会破坏表位
塑料 较硬的固定组织或需要切的很薄的组织样本（如样本需要电子显微镜观察时）
质地较硬，组织可以切的很薄（~微米）或者组织质地较硬（如骨头）
较昂贵
可能会干储存方式扰后续的染色实验
最佳切片温度介质(OCT) 快速冰冻组织
低残留、低背景信号
不透明从而使切片时难以定位组织
表四：免疫组织化学中的组织包埋方法。
表位回复
尽管使用福尔马林固定有许多优点，但是它却破坏了抗原表位的三维结构。可通过热诱导表位回复（HIER）逆转组织切片上的表位破坏。表位回复一般联合采用加热和酸/碱溶液;传统方法常把切片放在pH=6的柠檬酸钠缓冲溶液中加热，但有时高pH的缓冲液对某些抗原表位的回复更有效。切片和缓冲液可放在非常热的水浴、高压锅、高压锅或微波中加热，这取决于可用的设备。
标记/检测
切片标本可用好几种方法进行染色。通过酶标抗体和比色底物进行比色法是常用的。此法相对简单，反应稳定，切片可以通过标准显微镜读片分析。但是内源酶活性或链霉亲和素试剂对内源性生物素的非特异性结合，都可以提高背景信号强度，一般一个样品只能检测1-2个靶抗原。在这点考虑，通过免疫荧光或荧光染料标记的抗体检测标本更有优势，因为可以同时标记和检测多种靶抗原。但必须小心的是，偶联的荧光染料须避，以防荧光淬灭，因为这是不可逆的。
免疫金组织化学法可用作高分辨率分析。检测样品与偶联有不同大小的金颗粒的抗体孵育，从而可在单个样品中检测不同抗原。这些颗粒可以被高灵敏度和高分辨率的电子显微镜扫描检测到，从而可以在细胞和组织内对靶抗原进行非常精确的的定位。
Abcam抗体的保存技巧
对于abcam大部分抗体，比较合适的保存方式是分装后保存在 -20℃ or -80℃ 。
1 对绝大多数抗体来说，保存在-20℃是完全足够了。没有任何证据显示保存在-80℃ 会有更多的好处！
2 分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了由于多次从3 同一管中吸取抗体造成的污染可能性。
4 分装的量以一次实验用完为好，最少不能少于10ul每份。因为分装体积越小，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响
5 复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在4℃，避免再冻起来！
6 抗体工作液应该当天配制当天用完，在4℃ 尽量不要超过1天。
7 绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。尽量将抗体保存在冰箱里层，而不是门上
