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CD45,CD45(白细胞共同抗原)抗体

CD45,CD45(白细胞共同抗原)抗体

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更新日期:2026/7/21 11:08:47

生 产 地:美洲

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简单介绍:CD45,CD45(白细胞共同抗原)抗体保存条件 连续使用时4°C存储,保质期六个月;长期存储时建议分装为10ul以上小包装-20°C存储,并避免反复冻融,保质期一年。

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详细内容

产品资料

产品名称 CD45(白细胞共同抗原)抗体

缩 写 CD44

蛋 白 名 CD44 antigen

别 称 IN,LHR,MC56,MDU2,MDU3,MIC4,Pgp1,CDW44,CSPG8,HCELL,HUTCH-I,ECMR-III

规 格 0.1ml;0.2ml

免 疫 原 多肽

来 源 兔

特 异 性 抗人、大鼠、小鼠

克隆类型 多克隆

应 用 IH(P)免疫组化(石蜡);IH(F)免疫组化(冰冻);IC细胞免疫化学;WB免疫印迹

成 分 200μg/ml亲和纯化抗体,0.01M PBS,30%甘油。

保存条件 连续使用时4°C存储,保质期六个月;长期存储时建议分装为10ul以上小包装-20°C存储,并避免反复冻融,保质期一年。

背景资料 The protein encoded by this gene is a cell-surface glycoprotein involved in cell-cell interactions, cell adhesion and migration. It is a receptor for hyaluronic acid (HA) and can also interact with other ligands, such as osteopontin, collagens, and matrix metalloproteinases (MMPs). This protein participates in a wide variety of cellular functions including lymphocyte activation, recirculation and homing, hematopoiesis, and tumor metastasis. Transcripts for this gene undergo complex alternative splicing that results in many functionally distinct isoforms, however, the full length nature of some of these variants has not been determined. Alternative splicing is the basis for the structural and functional diversity of this protein, and may be related to tumor metastasis

操作流程
CD45(白细胞共同抗原)抗体染色质免疫沉淀操作步骤

染色质免疫沉淀的流程示意图

检测蛋白质-核酸分子间的相互作用

染色质免疫沉淀

染色质免疫沉淀(CHIP)最初是在20世纪80年代研究RNA聚合酶II与靶基因相互作用的过程中发展起来的 [1] 。在此过程中,细胞被固定在甲醛或类似的固定剂中以使细胞DNA和相关蛋白分子发生交联。固定的细胞随后经超声处理,使细胞中的DNA-蛋白质复合物断裂为100-300 bp的片段,然后用结合在DNA上的特异性蛋白(如组蛋白和转录因子)的抗体,按照标准方法免疫沉淀相关的DNA片段。最后,通过去交联分离DNA-蛋白复合物,再行PCR分析结合在蛋白上的DNA片段。理想情况下,标准的CHIP法是用来验证某个蛋白和某个假定的靶基因之间的相互作用,因为要根据假定的靶基因序列设计特异性PCR引物(图7)。

CHIP法有个局限性,即交联步骤可能会破坏蛋白分子结构,从而阻碍抗体与其结合,影响后续的免疫沉淀。此时,可以尝试无交联步骤的CHIP法;此过程称为N-ChIP的免疫沉淀法 [1, 2] 。尽管去交联提高抗原识别能力,但是一般只适用于目标蛋白强烈地结合在DNA上这种情况。

ChIP-on-Chip

最近,芯片被改良以用于高通量分析。例如,ChIP-on-Chip结合了CHIP法和微阵列技术,适用于荧光标记序列的全基因组筛选。在这些检测中,用不同的荧光染料标记沉淀组DNA和对照组DNA(通常不经沉淀的总输入),然后用各组DNA与DNA微阵列芯片甚至整个基因组小寡核苷酸进行杂交。通过标准化分析技术,可以从芯片获得CHIP样品相对于DNA对照组的DNA结合位点的详细信息。

染色质免疫共沉淀测序

将染色质沉淀技术与现代高通量测序技术相结合,从而有利于鉴定前所未知的靶基因序列。由于高通量测序可以鉴定和提供大量的基因组信息,因此染色质免疫共沉淀测序适用于整个基因组的染色质免疫沉淀检测 [3] 。

类似于染色质免疫沉淀技术用来分析DNA-蛋白质的相互作用,交联免疫沉淀技术可用于分析RNA-蛋白质的相互作用 [4] 。染色质免疫共沉淀测序的方法的类似于染色质免疫沉淀;然而,因为目标核酸不同,因此也存在几个明显的差异。在染色质免疫共沉淀测序中,推荐使用的交联剂是紫外线照射。由于转录组RNA一般较短,所以不需要经过超声处理,细胞可以在标准缓冲液中裂解。但是必须在所有的裂解产物中添加RNase抑制剂以防止目标RNA的降解 [5] 。

常见问题

CD45(白细胞共同抗原)抗体如何选择阳性对照?

如果您需要合适的阳性对照,请核查数据,上面通常会有建议的阳性对照。应始终确保所用组织或细胞系来自于测试过的物种。不是所有的数据表都有建议的合适对照,在这些情况下我们推荐以下步骤:

检查是否有关于这种抗体的任何 Abreviews。已由这些客户顺利采用的任何组织、细胞或溶菌产物都可以考虑用作合适的阳性对照。

尝试查看数据表上的 Swiss-Prot 或 Omnigene 数据库链接。这些数据库通常提供存在此种蛋白质表达的组织列表。这些组织也可考虑用作合适的阳性对照。

在 GeneCards 条目里查找这种蛋白质。通常您可在此处获得蛋白质在不同组织中的相对表达水平。

如果您仍然很难找到合适的对照,我们建议您来电咨询。

工作原理

抗体原理

(1)特异性结合抗原:抗体本身不能直接溶解或杀伤带有特异抗原的靶细胞,通常需要补体或吞噬细胞等共同发挥效应以清除病原微生物或导致病理损伤。然而,抗体可通过与病毒或毒素的特异性结合,直接发挥中和病毒的作用。

(2)激活补体:IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通过经典途径激活补体,凝聚的IgA、IgG4和IgE可通过替代途径激活补体。

(3)结合细胞:不同类别的免疫球蛋白,可结合不同种的细胞,参与免疫应答。

(4)可通过胎盘及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通过胎盘进入胎儿血流中,使胎儿形成自然被动免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通过消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。

(5)具有抗原性:抗体分子是一种蛋白质,也具有刺激机体产生免疫应答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。

(6)抗体对理化因子的抵抗力与一般球蛋白相同:不耐热,60~70℃即被破坏。各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质,均能破坏抗体的作用。抗体可被中性盐类沉淀。在生产上常可用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白,再经透析法将其纯化。

(7)通过与细胞Fc受体结合发挥多种生物效应

①调理作用

IgG、IgM的Fc段与吞噬细胞表面的FcγR、FcμR结合,增强其吞噬能力,通常将抗体促进吞噬细胞吞噬功能的作用称为抗体的调理作用 (opsonization)。

②发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用。

常用型号

典型的F(ab’)2片段的二抗

下面总结了几种具有不同特异性的二抗:针对整个抗体分子(H+L)具有特异性:如抗IgG(H+L),此类抗体既可以与抗体的重链结合也可以与轻链结合,即与抗体分子的Fc,F(ab’)2/Fab部分(见图5)均可反应,抗IgG(H+L)也可以与其他免疫球蛋白家族反应(如IgM和IgA),因为所有的免疫球蛋白都具有相同的轻链(kappa链或lambda链)。

针对Fab片段具有特异性:这类抗体与重链轻链均可以结合,由于它们可以与轻链反应,它们同时也已和具有相同轻链的其他种类的免疫球蛋白反应。

这对Fc片段或重链具有特异性:这类抗体和重链的Fc部分反应,一次它们是类别特异性的(即gamma链特异性抗体只与IgG反应,mu链特异性抗体只识别IgM,依此类推)。

轻链(kappa,labmda)特异性:与所有类别的抗体反应,因为所有类别的抗体均具有相同的lambda链或kappa链。

经过吸附处理的二抗:不同来源的免疫球蛋白含有相似的结构,抗一个物种的抗体可能与其他物种发生交叉反应,一次有些二抗经过了动物或人类IgG吸附处理,以减少非特异性背景。例如,如果是小鼠的组织或细胞,那么选择经小鼠血清或IgG吸附处理过的二抗可以减少非特异性结合。但是此种抗体识别表位的数量被大大减少。

选择哪种形式的二抗,是整个IgG分子,F(ab’)2片段,还是Fab片段?

整个IgG分子:此种抗体适用于多数情况。

F(ab’)2片段:该种抗体是由两个靠二硫键连接的用于结合抗原的Fab片段组成,这些抗体用在特定的情况中,如需要避免抗体与具有Fc受体的细胞结合的情况。

Fab片段:它们只有一个结合位点,一般用来封闭内源性免疫球蛋白。

选用耦联有哪种探针的二抗?

一般来讲,耦联到二抗上的探针主要有酶(辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP,PAP),荧光基团(FITC, RRX, TR, PE)和生物素。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。对于western blot和ELISA,最常用的二抗是酶标二抗,而细胞或组织标记实验(细胞免疫化学,组织免疫化学,流式细胞术)中通常使用荧光基团标记的二抗,免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的二抗。如果想要更大程度的放大检测信号,可以使用biotin/avidin检测系统。

CD45,CD45(白细胞共同抗原)抗体

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