采用三重四极杆液质联用系统对中药材中30种禁用农药进行检测

本文采用 三重四极杆液质联用系统建立了药材及饮片中的禁用农药多残留 分析方法。该方法针对不同中药材基质，采用以 QuEChERS 为主的样品前处理方案，符 合中国药典 2020 版对中药残留农药提取和净化的要求；同时以固相萃取法作为对复杂中 药基质净化的补充。分离方法基于 Agilent 1290 Infinity HPLC 和 InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 液相色谱柱。所用检测系统为安捷伦独有的配备 Cyclone Ion Guide 气旋离子导 轨及 Vortex Collision Cell 涡流碰撞室的小型化 Ultivo 三重四极杆液质联用系统，该系统 还配备高效抗污染的喷射流 (AJS) 离子源，在正离子模式下完成对 30 种农药的分离和检 测。该方法在不同农药浓度范围内具有良好的线性，相关系数 R2 ≥ 0.9990，定量限均满 足《0212 药材和药片检定通则》[1] 的要求。采用 Agilent Bond Elut QuEChERS 中国药典中 药中农残专用净化包，可有效净化样品，消除基质干扰，使不同中药材基质中的分析物回 收率在 50%–130% 之间。证明安捷伦液质联用系统在满足药典检测要求的基础上，能够 实现对不同药材中农药残留的高灵敏度、高通量检测。

前言 中药材中的主要常见农药残留包括有机氯类、有机磷类、拟除虫 菊酯类、氨基甲酸酯类等。这些农药污染主要源于种植过程中的 滥用农药，其次来源于中药材生长的土壤环境以及采收、储藏过 程中受到的农药二次污染[2]。农药残留与中药材的质量安全密切 相关。科学种植中药材、合理有效使用农药，并将农药残留风险 降到最低水平，是我国中药材产业健康发展的重要保证[3]。 2019 年 8 月，国家药典委员会拟修订《中国药典》2015 年版四 部“0212 药材和饮片检定通则”，对检定对象及限量指标进行了 明确规定，并在第五法（“2341 农药残留量测定法”中公示新 增了“第五法 药材及饮片（植物类）中禁用农药多残留测定法） 中给出禁用农药的具体测定方法。其中第五法要求以 LC-MS/MS 和 GC-MS/MS 为主要检测手段。检测的农药有 33 种，共计 55 种 化合物，并规定所有禁用农药都不得检出（测定含量低于定量限 0.01–0.1 mg/kg）。30 种化合物通过 LC-MS/MS 方法进行检测， 35 种化合物通过 GC-MS/MS 方法进行检测，其中 11 种化合物同 时适用 LC-MS/MS 和 GC-MS/MS 方法。 安捷伦 LC-MS/MS 技术平台具有高选择性、高灵敏度、高通量 和高效率等特点，适用于同时分析基质复杂、类型多样的中药材 中的多种农药残留。本应用简报展示了一种对中药材中 30 种农 药进行分离检测的 LC-MS/MS 方法，该方法将低扩散、低残留 的 Agilent 1290 Infinity HPLC 与 Agilent Ultivo 三重四极杆液质联 用系统结合使用。化的 LC-MS/MS 方法同时适用于 Agilent Ultivo、6470、6495 等不同型号的三重四极杆质谱仪器，方法转 化无缝对接。

实验部分 试剂和样品 乙腈为分析纯，购自德国默克 (Merck)；甲酸和甲酸铵为分析 纯，购自美国 Sigma-Aldrich 公司；所用实验用水为 Millipore Milli-Q 超纯水系统现制备的高纯去离子水；30 种农药混合标准品 溶液（药典 2341 农残测定 LC-MS）由天津阿尔塔科技公司提供 （部件号 1ST29486），其中各化合物的浓度如表 2 所示。测定的 7 种中药材 白芍、麦冬、板蓝根、黄芩、何首乌、佛手、厚朴等 均来源于正规中药材批发市场。

仪器和设备 液相部分为 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统，该系统主要包括 以下组件： – Agilent 1290 Infinity 二元泵（部件号：G4220A） – Agilent 1290 Infinity 标准自动进样器（部件号：G4226A） – Agilent 1290 Infinity 柱温箱（部件号：G1316C） – 质谱部分为 Agilent Ultivo 三重四极杆液质联用系统，其配备喷 射流 (AJS) 离子源 – 采用 Agilent MassHunter B.10 工作站软件进行数据采集、确 证和定量分析

标准品配制 取混合标准品溶液（其中 30 种农药化合物的浓度各不相同，将 其稀释 1000 倍，即达到药典规定的定量限），用含 30% 水的乙 腈溶液逐级稀释，得到浓度分别为 0.1、0.2、0.5、1、5、25、 50 ng/mL 的标样（以甲胺磷为例）。其它农药以相同的比例逐级 稀释，现配现用。

样品前处理 样品前处理方法以 Agilent Bond Elut QuEChERS（部件号 5982-5755CH 和 5610-2048）为主[4]，操作流程如图 1 所示。对于 复杂中药基质的净化，采用固相萃取法作为补充，其中采用 Agilent Bond Elut Plexa（部件号 12109206）和 Bond Elut Carbon/NH2 （部件号 12252202）固相萃取柱。

结果与讨论 如图 2 所示，采用上文所述的色谱和质谱条件，在 10 min 内即可完成对购买的标准品通过稀释后配制的 30 种农药混合标 准品溶液进行色谱分离，且各化合物之间的分离效果及色谱峰形均满足药典分析要求，同时展现了薄壳填料型 C18 色谱柱 的分离性能。

不同农药在相应的不同浓度范围内的线性关系良好，相关系数 R2 ≥ 0.9990，定量限满足且低于《0212 药材和药片检定通 则》要求，结果详见表 2。 本方法同时考察了 30 种农药在七种中药材基质中的灵敏度和回收率，回收率以定量限对应浓度作为标准添加，结果列于 表 3 中。其中白芍、麦冬、板蓝根、黄芩、何首乌等属于根及根茎类，佛手属于果实种子类，厚朴属于树皮类。所选择的 七种药材在中药及中药处方中使用率较高，代表不同的用药部分，同时涵盖多种基质，例如淀粉、纤维、色素、糖和挥发 油等。从分析结果来看，各种药材中目标化合物的回收率基本满足药典规定要求，在 50%–130% 之间。

结论 本方法采用 Agilent 1290 Infinity UHPLC 结合 Ultivo 三重四极杆液 质联用系统建立了对应于《中国药典》规定的农药残留 LC-MS/MS 分析方法。该方法灵敏度高、专属性强，能够结合 Agilent Bond Elut QuEChERS 快速前处理方法对不同中药材基质中的残留农药进 行准确的定量分析，结果满足 2020 版药典 2341 第五法的要求。

来源：上海斯迈欧分析仪器有限公司