中文名称:小鼠琥珀酸脱氢酶(SDH) elisa试剂盒
英文名称:Mouse SDH ELISA kit
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小鼠琥珀酸脱氢酶(SDH) elisa试剂盒用途:
本试剂盒仅供科研使用,定量检测细胞液、体液、组织、血清、血浆等标本中小鼠琥珀酸脱氢酶(SDH) 的含量。
小鼠琥珀酸脱氢酶(SDH) 原理:
采用双抗体夹心法测定小鼠琥珀酸脱氢酶(SDH) 水平。用纯化的小鼠琥珀酸脱氢酶(SDH) 抗体包被微孔板,制成固相载体,实验时依次在微孔板中加入样本及标准品,并加入HRP标记的抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,反复洗涤后加底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化为蓝色,再用硫酸终止反应,转变成黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠琥珀酸脱氢酶(SDH) 含量呈正相关。采用酶标仪在450nm波长测定吸光度(OD值),根据标准曲线,计算测试样品中小鼠琥珀酸脱氢酶(SDH) 浓度。
小鼠琥珀酸脱氢酶(SDH) elisa试剂盒试剂盒组成
序号 | 名称 | 规格 |
1 | 酶标包被板 | 96孔*1可拆卸板 |
2 | 酶标试剂 | 6ml*1瓶 |
3 | 标准品 | 0.6ml*1瓶 |
4 | 标准品稀释液 | 2ml*1瓶 |
5 | 生物素标记的抗体 | 1.5ml*1瓶 |
6 | 显色剂A液 | 6ml*1瓶 |
7 | 显色剂B液 | 6ml*1瓶 |
8 | 终止液 | 6ml*1瓶 |
9 | 浓缩洗涤液(*30) | 20ml*1瓶 |
10 | 封板膜 | 1张 |
11 | 使用说明书 | 1份 |
实验材料与试剂配制:
1. 仪器与材料:酶标仪(使用前预热30分钟),微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水,滤纸。
2. 洗液的配制:按1:30的比例配制洗液备用。
样品收集、处理及保存
1. 细胞培养上清:适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液,以1000×g离心15分钟,收集上清。
2. 细胞:用PBS反复洗涤细胞3次,调整细胞浓度达到104-106/ml 左右,通过反复冻融,使细胞破坏并放出细胞内成份,或者细胞超声粉碎,离心取上清液检测。
3. 血清:在室温下,血液自然凝固,以1000×g离心15分钟,取上清待测。
4. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合后静置10-20 分钟后,以1000×g离心15分钟,收集上清。
5. 体液:包括胸腹水、脑脊液,分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集,以1000×g离心15分钟,收集上清。
6. 组织标本:切取组织标本,称取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或匀浆器,或超声破碎仪将标本匀浆,以2000-3000 rmp离心20 分钟,收集上清进行检测。
7. 样品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
8. 保存:如果样品不能立即检测,应将其分装,-70 ℃保存,避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀,应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
小鼠琥珀酸脱氢酶(SDH) elisa试剂盒操作步骤:
1. 取出试剂盒,室温(20-25℃)放置30分钟。
2. 分组:取出96孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组(6个浓度)、空白孔、待测样品组。
标准品的稀释:准备小试管6 只,依次编好号码,先在各小试管中加入标准品稀释液100ul,然后取原浓度标准品100ul 加入一只已编好号的试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第三只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第四只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第五只试管中,充分混匀;然后在该试管中取100ul,弃掉。第六只试管作为0 号标准品。
注:为减少实验误差,保证准确性,建议设置复孔。
3. 加样:依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入50ul的蒸馏水;其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
4. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒弃去,如此重复5 次,拍干。
6. 加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液(空白对照孔除外)。
7. 温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。
8. 洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置15-30s,充分清洗酶标板5次,用吸水纸彻底拍干。
9. 显色:各孔加入显色剂A液50ul后,再加入显色剂B液50ul。
10. 终止:25-37℃下避光反应10-15分钟,加入50ul终止液。
11. 读板:在450nm波长读取各孔的OD值。
注:读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹,读板时间控制在终止反应后的30分钟内,以免影响准确性。
小鼠琥珀酸脱氢酶(SDH) elisa试剂盒数据计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,即为样品的实际浓度。
小鼠琥珀酸脱氢酶(SDH) elisa试剂盒注意事项:
1. 实验操作中必须使用一次性吸头,避免交叉污染。
2. 加样:加样时,要控制加样速度,避免第一孔与最后一孔间的时间间隔过大,否则将会导致不同的预孵育时间,从而影响实验的准确性以及重复性。
3. 孵育:严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。
4. 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化,如果颜色较深,请提前加入终止液终止反应。
5. 建议实验前预测样品含量,如样品浓度过高,应对样品进行稀释,计算结果时乘以相应的稀释倍数。
6. 建议使用本试剂盒时先做预实验(即先做标准曲线,试用几个标本),如果对本试剂盒有任何疑问,可和所购经销商联系,如果因运输过程导致试剂盒失效,可要求调换,但概不承担产品本身以外的任何损失。
小鼠琥珀酸脱氢酶(SDH) elisa试剂盒安全性
1. 避免人体直接接触显色剂A、B和终止液。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2. 实验中不要进食、抽烟或使用化妆品。
3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
小鼠琥珀酸脱氢酶(SDH) elisa试剂盒保存条件及有效期:
1. 试剂盒保存:2-8℃
2. 有效期:6个月
产品名称: | 人山梨醇脱氢酶(SDH)ELISA 试剂盒 | |||||
产品英文名称: | Human sorbitol dehydrogenase,SDH ELISA kit | |||||
规格: | 48T/96T | |||||
检测方法: | 双抗体夹心酶联免疫法(ELISA) | |||||
标本: | 血清,血浆,细胞上清液,组织等 | |||||
种属: | Human\\人 | |||||
试剂盒说明书: | 请来电或者邮件索取 | |||||
人山梨醇脱氢酶(SDH)ELISA 试剂盒 | ||||||
实验材料与试剂配制: | ||||||
1. 仪器与材料:酶标仪(使用前预热30分钟,微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水,滤纸。 | ||||||
2. 洗液的配制:按 1:100的比例配制洗液备用。 样品收集、处理及保存 | ||||||
1. 细胞培养上清:适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集上清液,以1000×g离心15 | ||||||
分钟,收集上清。 | ||||||
2. 细胞:用PBS反复洗涤细胞 3次,调整细胞浓度达到10^4-10^6/ml左右,通过反复冻融, | ||||||
使细胞破坏,并放出细胞内成份。或者细胞超声粉碎,离心取上清液检测。 | ||||||
3. 血清: 在室温 下, 血液自然凝固,以1000×g离心15分钟,取上清待测。 | ||||||
4. 血浆:应根据标本的要求选择 EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合后静置 10 -20 分钟后, | ||||||
以1000×g离心15分钟,收集上清。 | ||||||
5. 体液:包括胸腹水、脑脊液,分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集 ,以 1000×g | ||||||
离心、15 分钟 ,收集上清。 | ||||||
6. 组织标本:切取 组织标本,称取重量0.5mg加入500ul 的PBS,用手工或匀浆器,超声破碎仪, | ||||||
将标本匀浆,以2000 -300rmp离心 20 分钟 ,收集上清进行检测 。 | ||||||
7. 样品 中不能含有 NaN3,因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的( HRP)活性。 | ||||||
8. 保存 :如果样品不能立即检测,应将其分装,-80 ℃保存,避免反复冷冻。保存过程中如出现 | ||||||
沉淀,应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高脂。如果血清中含大量颗粒,检测前先离心 | ||||||
或过滤。不要在 37 ℃或更高的温度加热解 或更高的温度加热解 或更高的温度加热解或更高的温度 | ||||||
加热解或更高的温度加热解冻。应在室温下解并确保样品均匀地充分解冻。 | ||||||
人山梨醇脱氢酶(SDH)ELISA 试剂盒 | ||||||
操作步骤 : | ||||||
1. 取出 试剂盒,室温( 20 -25 ℃)放置 30 分钟。 | ||||||
2. 分组: 取出 96 孔板 根据待测样品数 量加上标准品的数量决定所需板条,把剩余的板条继续 | ||||||
冷藏处理,分别设标准品组(6个浓度)、空白 孔、待测样品组。 | ||||||
注:为减少实验误差,保证准确性,建议设置复孔。 | ||||||
3. 加样:依照标准品的顺序分别加入100ul 的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入100ul的 | ||||||
蒸馏水;其余微孔中加入100ul的待测样本。 | ||||||
4. 加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入50ul 的酶标溶液 (空白对照孔除外)。 | ||||||
5. 温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于 37 ℃恒温孵育恒温孵育 1小时。 | ||||||
6. 洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置15 -30s 30s,充分清洗酶标板5次,用吸水纸彻底拍干。 | ||||||
7. 显色:各孔加入显色剂A液 50ul 后,再加入显色剂 B液 50ul 。 | ||||||
8. 终止: 25 -37 ℃下避光反应10 -15分钟, 加入 50 ul 终止液。 | ||||||
9. 读板:在 450nm波长读取各孔的O 值。注: 读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹, | ||||||
读板时间控制在终止反应后的30 分钟内,以免影响准确性。 | ||||||
人山梨醇脱氢酶(SDH)ELISA 试剂盒 | ||||||
数据计算 | ||||||
1. 绘制标准曲线:各标准品 OD 值减去底色即坚强空白孔OD 值(数据处理如下),绘制标准曲线图。 | ||||||
1.1软件处理:建议用户使logit-log模式或四参数据处理模式( y=(a-d)/(1+(x/c)^b)+d ) | ||||||
1.2计算器或手工作图处理:Logit-log 计算:以6个标准品OD 值的 Logit为纵坐标 y,以标准品的 | ||||||
浓度的 log值为横坐标X,绘制曲线图。logit值计算公式如下:logit=ln(B/ B0)(1-B/ B0)手工 | ||||||
作图:以标准浓度取log值为横坐标,对应的logit值为纵坐标,在普通坐标纸上或以标准浓度为 | ||||||
横坐标,对应的 B/B0B为纵坐标在 logit-log坐标纸上画出标准曲线(理想化时是一条直)。 | ||||||
2. 根据待测样品的B/B0可以从坐标纸上查出样品的浓度值。注意:如果使用普通坐标纸,查出的 | ||||||
数值应取反对数才是最后浓度值。 | ||||||
3.敏感度:1.0µmol/L | ||||||
人山梨醇脱氢酶(SDH)ELISA 试剂盒 | ||||||
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【中文名称】:人山梨醇脱氢酶(SDH)elisa试剂盒
【英文名称】:Humansorbitoldehydrogenase,SDHELISA Kit
【产品规格】:96T/48T。
【产品货号】:YM-S1320。
【试剂盒成分】:酶标板,试剂,标准品等ELISA试剂盒检测范围:人、绵羊、山羊、牛、马、小鼠、大鼠、猪、兔、其它动物细胞因子、植物细胞因子、细胞凋亡、活性多肽、自身抗体、血栓与止血、骨代谢、肝纤维化、肿瘤、激素内分泌、自身抗体科研Elisa检测试剂盒。
主要用于科研方面,不用于临床诊断。可以用于检测各种指标。
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人山梨醇脱氢酶(SDH)ELISA试剂盒是本产品的中文名称
英文名称:Rat Angiotensin converting enzyme,ACE ELISA Kit
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试剂盒产地:进口/国产
储存方式:2-8℃
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人SDH elisa试剂盒
产品别名:人山梨醇脱氢酶ELISA试剂盒
英文名称:Human sorbitol dehydrogenase,SDH ELISA KIT
包装:96T/48T
价格:询价(010-57269780,15311645695 在线QQ:1261299569)
ELISA关键步骤为以下几点:1、尽量用八道或者十二道移液器加样。对于相同的试剂,经如二抗,酶,显色液,终止液等。2、自己的样品,因为每一孔的样品不一样,用排枪加有些麻烦,如果一次的样品比较少,而自己加样又比较快,可以一个孔一个孔的加,但如果想一次把96或者48T的做完,可以先摆好一些PCR管或者准备一个96孔细胞培养板。将自己的样品先加到PCR管或者培养板中(此板间距与酶板板相同)。记得加一定的余量,如一次加样是50ul,可以先加70ul。加完后再用排枪加样,这样可以缩短加样时间,减小每个孔间的时间误差。3、如果有多余的孔,标准品孔可以做复孔,在自己的样品前加一次标准品,加完样品后再加一次标准品。如果孔不够,那么可以将标准品放在样品中间加。
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中文名称 : 小鼠琥珀酸脱氢酶(SDH)ELISA试剂盒
英文名称:Mouse SDH ELISA kit
产品类别:小鼠酶联免疫试剂盒 用于科研实验 不使用于临床
ELISA试剂盒规格:48T/96T
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