细胞冻存液（20%血清、10%DMSO、70%基础培养液），梯度降温盒

（2） 步骤

        1.选取活力好，密度约70%细胞用于冻存，此时细胞处于对数生长期，*适合用于冻存。

        2 .细胞吹打或者胰酶消化后，转移至无菌EP管，1000rpm里面5min。

        3.弃上清，加入新鲜配制的细胞冻存液，25T细胞可以加入2ml细胞冻存液，分装2个冻存管，细胞*佳密度为5*106-1*107个每ml。

        4.做好标记，放入梯度降温盒（提前平衡至室温）。

        5.将梯度降温盒放入-80℃冰箱过夜，第二天取出冻存管，快速放入液氮保存。

氧化碳培养箱是进行细胞培养的必要设备，那么在培养细胞时有哪些经验是我们可以借鉴的呢？下面让我们一起来看一下。

1、启蒙老师的重要性

一般进实验室都有师兄师姐带着做，他们就是你做细胞的启蒙老师。他们的操作手法、细节、理论讲解就成了你操作的准则，如营养液、细胞瓶的摆放位置；灭菌处理程序；开盖手法；细胞吹打手法等等。要学会他们的正确操作，在次的时候就要重视。

2、像养孩子一样养细胞

细胞真的很脆弱，每天都去看看它，以防止出现培养箱缺水、缺二氧化碳、停电、温度不够等异常现象，也好及时解决这些意外，避免重复实验带来的更大痛苦。

3、好细胞要及时保种

细胞要分批传代，这样即使有一批出了问题，还有一批备用的。像后者一般人可能不容易做到。有一次细胞污染了，全军覆没。当时可后悔没有保种。

4、每种细胞都有自己的特性，要区别对待。

细胞跟人一样，不同的细胞，培养特性是不一样的。培养过程中要细细体会。不同细胞株使用不同的培养基和血清。

如平滑肌细胞很活跃，喜欢热闹，2~3 天就好多人口，而且不太爱吃喝，真是养的孩子了。内皮细胞和平滑肌细胞性格相近，不过它很不讲卫生，也很邋遢，里面有很多分泌屋，要经常换洗才行。RAW264.7 细胞也很开朗，而且很能吃，要经常喂它，头疼的是细胞很容易活化，培养它的瓶子和环境没有内毒素才好。

 

安徽细胞培养箱HH.CP-TW二氧化碳培养箱160升参数规格

 安徽细胞培养箱HH.CP-TW二氧化碳培养箱160升主要优点二氧化碳培养箱的作用

多实验室细胞培养失败，污染是导致细胞培养失败的一个主要因素，二氧化碳培养箱的制造商们设计了多种不同的装置去减少和防止污染的发生，其主要途径都是尽量减少微生物可以生长的区域和表面，并结合自动排除污染装置来有效防止污染的产生。

　　了解到用户对二氧化碳培养箱都有两条*基本的要求：一是要求二氧化碳培养箱能够对温度、二氧化碳浓度和湿度提供*精确稳定的控制，以便于其研究工作的进展;二是要求二氧化碳培养箱能够对培养箱内的微生物污染进行有效的防范，并且能够定期消除污染，以保护研究成果，防止样品损失。

　　二氧化碳培养箱是通过在培养箱箱体内模拟形成一个类似细胞/组织在生物体内的生长环境，如稳定的温度（37°C）、稳定的CO2水平（5%）、恒定的酸碱度（pH值：7.2-7.4）、较高的相对饱和湿度（95%），来对细胞/组织进行体外培养的一种装置。

　　的二氧化碳培养箱使用注意事项

　　1、二氧化碳培养箱未注水前不能打开电源开关，否则会损坏加热元件。

　　2、培养箱运行数月后，水箱内的水因挥发可能减少，当低水位指示灯（WLow12）亮时应补充加水。先打开溢水管，用漏斗接橡胶管从注水孔补充加水使低水位指示灯熄灭，再计量补充加水（CP-ST200A加水1800ml，CP-ST100A加水1200ml），然后堵塞溢水孔。

　　3、二氧化碳培养箱可以做高精度恒温培养箱使用，这时须关闭CO2控制系统。

　　4、因为CO2传感器是在饱和湿度下校正的，因此加湿盘必须时刻装有灭菌水。

　　5、当显示温度超过置定温度1℃时，超温报警指示灯（OverTemp7）亮，并发出尖锐报警声，这时应关闭电源30分钟;若再打开电源（温控）开关（Power20）仍然超温，则应关闭电源并报维修人员。

　　6、钢瓶压力低于0.2MPa时应更换钢瓶。

　　7、尽量减少打开玻璃门的时间。

　　8、如果二氧化碳培养箱长时间不用，关闭前必须清除工作室内水分，打开玻璃门通风24小时后再关闭。

　　9、清洁二氧化碳培养箱工作室时，不要碰撞传感器和搅拌电机风轮等部件。

　　10、拆装工作室内支架护罩，必须使用随机专用扳手，不得过度用力。

　　11、搬运培养箱前必须排除箱体内的水。排水时，将橡胶管紧套在出水孔上，使管口低于仪器，轻轻吸一口，放下水管，水即虹吸流出。

　　12、搬运二氧化碳培养箱前应拿出工作室内的搁板和加湿盘，防止碰撞损坏玻璃门。

　　13、搬运培养箱时不能倒置，同时一定不要抬箱门，以免门变形。