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技术文章
吖啶橙（AO）荧光染色试剂盒（两步法）技术资料
点击次数：4228 发布时间：2015/5/21 11:35:22
吖啶橙（AO）荧光染色试剂盒（两步法）
产品简介：
吖啶橙（Acridine Orange, AO）属于三环杂芳香燃料, 既可以标记 DNA，又可以标记
RNA,属于异染性荧光染料，因此 AO 常用于细胞内 DNA 和 RNA 进行检测。
AO 与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO 嵌入核酸双链的碱基对之间，这种
结合方式主要为 AO 与 DNA 的结合，其荧光发射峰为 530nm，激发后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的 AO 与单链核酸的磷酸根（带负电荷）产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为 AO 与 RNA 的结合，其荧光发射峰为 640nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。
Acridine Orange 具有膜通透性，能透过细胞膜，使核 DNA 和 RNA 染色。因此，
在荧光显微镜下观察， 吖啶橙可透过正常细胞膜， 使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；
而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使
其染上致密浓染的黄绿色荧光， 或黄绿色碎片颗粒； 而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
产品组成：
| 名称 | 组成 | 包装50T | 包装100T | 储存条件 |
| 试剂（A）: | AO Detergent | 1ml | 2ml | RT |
| 试剂（B）: | AO Detergent Dilution Buffer | 1ml | 2ml | RT |
| 试剂（C）: | AO 储存液（1mg/ml） | 1ml | 1ml | 4℃ 避光 |
| 试剂（D）: | AO Dilution Buffer | 100ml | 20 0ml | RT |
| 使用说明书 | 1 份 | |||
主要成分：
试剂（A）: 主要由 Detergent、去离子水等组成。
试剂（B）: 主要由金属盐离子、去离子水等组成。
试剂（C）: 主要由 Acridine Orange、去离子水等组成。
试剂（D）: 主要由磷酸盐、氯化钠、去离子水等组成。
自备材料：
1、 荧光显微镜
2、 PBS
3、 预冷的固定液：4%多聚甲醛固定液或 70%乙醇
4、 细胞计数板
5、 载玻片
操作步骤（仅供参考） ：
1、 AO Detergent 工作液的配制: 取适量的 AO Detergent 与 AO Detergent Dilution
Buffer， 按 AO Detergent： AO Detergent Dilution Buffer： 蒸馏水或去离子水=1:1:8
稀释待用。混合后可以 4℃储存 2 周。
2、 AO 染色工作液的配制:将 AO 储备液（1mg/ml）用蒸馏水或去离子水按 9:1 稀释后，
再用 AO Detergent Dilution Buffer 将 AO 稀释到最终浓度为 6mg/ml，4℃储存。AO
染色工作液储存时间较短，配制 24h 后不可用。
3、 细胞计数，取 1´10
6
/ml 细胞。
4、 PBS 清洗细胞，低速离心后，去除固定液，获得细胞沉淀。
5、 加入 0.4ml 或适量的 AO Detergent 工作液，混匀静置 30s。
6、 迅速加入 0.4ml 或适量的 AO 染色工作液。
7、 室温（23～25℃）下, 染色 10～15min。
8、 上机分析或荧光显微镜下观察。
注意事项：
1、 AO 与核酸的结合在低浓度下最佳，插入性强，结合方式占优势（AO/DNA-P<0.2）。
2、 在双参数染色时， 最好使 RNA 在原位上形成单链 （采取酸变性） ， 可以用 EDTA 解链法，
AO 也可以使没有解链的 RNA 继续解链。
3、 AO 分子量大，不易进入细胞内，可以用 AO Detergent 在细胞膜上打开通道，一般用
AO Detergent，使 AO 进入细胞内。
4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 6 个月有效。
原创作者：上海远慕生物科技有限公司
