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技术文章
AMPPD 发光显色试剂盒技术资料
点击次数：3530 发布时间：2015/5/21 11:34:28
AMPPD 发光显色试剂盒
产品简介：
AMPPD 是碱性磷酸酶的化学发光底物，在适宜的缓冲液中，随着酶的催化水解作用，
AMPPD 分解成 AMP-D，后者发出强度很高的光信号，其发光的速度取决于碱磷酶的浓度。
当碱磷酶偶合到杂交的探针时，便可以通过此系统检测到杂交分子的存在量。乙醇胺可使光信号输出更理想。AMPPD 为 1，2-二氧环已烷衍生物，它是一种生物化学领域中最新的超
灵敏的碱性磷酸酶底物，其特点：反应速度快，在很短时间内提供正确可靠的结果。在它的
分子结构中有两个重要部分，一个是联接苯环和金刚烷的二氧四节环，它可以断裂并发射光子；另一个是磷酸根基团，它维持着整个分子结构的稳定。在通常情况下，这种化合物很稳定。但是，结果有碱性磷酸酶存在，Dioxetane Phosphate 作为酶的底物会在酶的催化一
脱去磷酸根基团，形成一个不稳定的中间体。 这个中间体随即自行分解 （二氧四节环断裂） ，同时发射光子。
AMPPD 发光显色试剂盒适用于 PVDF 膜，不推荐用于硝酸纤维素膜。
产品组成：
| 名称 规格 |
25T |
50T |
Storage | |
| 试剂（A）: Dioxetane Buffer | A1: Dioxetane A | 50ml | 100ml | -20℃ |
| A2: Dioxetane B | 50ml | 100ml | -20℃ | |
| 临用时，取 A1、A2 等量混合，即为 Dioxetane Buffer，不可预先配制。 | ||||
| 试剂（B）: AMPPD | 2.5mg | 5mg | 避光 | |
| 使用说明书 | 1份 | |||
自备材料：
2、Tris 盐缓冲液（TBS）
3、透明的塑料保鲜膜
4、蒸馏水
操作步骤（仅供参考）：
1、 临用前，取适量的 A1 和 A2，等量混合后获得 Dioxetane Buffer。
2、 按 2.5mgAMPPD 溶于 25ml Dioxetane Buffer, 配制 0.1mg/ml AMPPD 底物溶液即
为 AMPPD Dioxetane Buffer（发色发光显迹液），用于膜的染色。
3、 取适量 Dioxetane Buffer 洗膜两次，每次 15min。
4、 对于 PVDF 膜进行的碱性磷酸酶反应, 膜置于新鲜配制的 AMPPD Dioxetane Buffer
作用 5min。
5、 将膜移入适量的 AMPPD Dioxetane Buffer 中，浸泡 5min（AP 反应）。
6、 取出 PVDF 膜，滴干水分，将膜正面朝下放在一张透明的塑料保鲜膜上，向后折叠将膜
包裹起来，成为不漏水的封闭体。
7、 在暗房中，将膜正面朝下放在感光胶片上，曝光数秒至数小时。
8、 如需要，在室温下以适量的 TBS 洗膜 15min。
9、 将膜放入 AMPPD Dioxetane Buffer，条带应在 10~30min 内出现。
10、用蒸馏水洗膜，终止反应。晾干后拍照留永久的记录。
注意事项：
1、 PVDF 膜置于胶片上后，不要改变位置。
2、 曝光时间应根据实验情况，自行摸索。
3、 配制好的 AMPPD Dioxetane Buffer，应避光低温保存。
4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 12 个月有效。
原创作者：上海远慕生物科技有限公司
