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技术文章
考马斯亮蓝法检测蛋白质浓度的优点和缺点，你清楚吗？
点击次数：7728 发布时间：2020/7/9 14:32:19
考马斯亮蓝法检测蛋白质浓度的优点和缺点，你清楚吗？
蛋白质浓度测的是实验中特别常见的情况，测试方法也特别多，其中考马斯亮蓝测定蛋白质是非常常见也是用的特别广泛的一种方式它利用比色法和色素法混合方法、操作简便！但是这种方法的优点和缺点，不知道你清楚吗，有理解多少，让我们跟着上海信帆生物科技有限公司的技术老师来认识的学习和了解一下吧！
考马斯亮蓝实验原理
考马斯亮蓝(Coomassie Brilliant Blue)法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质―染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度高的蛋白质测定法。
考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的吸收峰(lmax)的位置，由465 nm变为 595 nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。通过测定595 nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。研究发现，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸(特别是精氨酸)和芳香族氨基酸残基相结合。
考马斯亮蓝染色法的突出优点是：
(1)灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其低蛋白质检测量可达1 mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很，蛋白质-染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要的多。
(2)测定快速、简便，只需加一种试剂。完成一个样品的测定，只需要5分钟左右。由于染料与蛋白质结合的过程，约只要2分钟即可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性好。因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。
(3)干扰物质少。如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。
此法的缺点是：
(1)由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此考马斯亮蓝染色法用于不同蛋白质测定时有较的偏差，在制作曲线时通常选用g—球蛋白为蛋白质，以减少这方面的偏差。
(2)仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、 Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)等。
通过上面的讲解，家是不是对考马斯亮蓝法测蛋白浓度有了更进一步的认识呢？希望通过这篇文章，家都能选择适合自己的方法进行蛋白浓度测定！
考马斯亮蓝法检测蛋白质浓度的优点和缺点，你清楚吗？
通过上面的讲解，家是不是对考马斯亮蓝法测蛋白浓度有了更进一步的认识呢？希望通过这篇文章，家都能选择适合自己的方法进行蛋白浓度测定！
考马斯亮蓝法检测蛋白质浓度的优点和缺点，你清楚吗？
原创作者：上海信帆生物科技有限公司
