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细胞STR鉴定注意事项#台风新闻
点击次数：3320 发布时间：2022/2/15 14:05:35
送样要求：
1. 基因组DNA: OD 260/280 在1.8～2.0之间, 浓度≥50ng/μl,体积≥20μl；
2. 组织块：介于绿豆粒~黄豆粒大小之间即可，
3. 新鲜细胞：（1）细胞数≥106；（2）贴壁细胞经胰蛋白酶消化后，离心收集细胞沉淀；（3）悬浮细胞直接离心收集细胞沉淀；（4）PBS清洗细胞沉淀，尽可能去除培养基与胰酶；
4. 冻存细胞：细胞数≥106，冻存细胞从液氮罐中，37℃水浴复苏，融化后离心收集细胞沉淀，尽可能去除冻存液，否则会影响DNA抽提质量；
5. 样本寄送：应在送样包裹中放置冰袋或干冰，建议顺丰快递；
6. 为了bao证DNA抽提质量，确保细胞在消化或冻存，细胞状态良好，处于生长对数期；
不建议以细胞悬液或细胞培养瓶形式寄送样本
细胞STR鉴定样本收集步骤参考
收集悬浮细胞沉淀步骤：
1.将细胞悬液转移至离心管中
2. 200X g，离心10min，收集细胞
3. 移除上清液，用PBS清洗细胞沉淀1-2次
4. zui后200X g，离心10min，收集细胞沉淀
收集贴壁细胞沉淀步骤：
1.移除细胞培养基。
2.沿着培养皿壁缓慢加入PBS（无钙镁离子），勿将细胞冲离培养皿，温和晃动培养皿，清洗细胞表面。
3.移除PBS。
4.加入细胞消化液（如胰蛋白酶等），使消化液能覆盖所有细胞。在37℃孵育2-3min，温和晃动培养皿知道细胞开始剥离培养皿。
5.加入培养基终止消化，温和重悬细胞
6.200X g，离心10min，收集细胞
7.移除上清液，用PBS清洗细胞沉淀1-2次
8.zui后200X g，离心10min，收集细胞沉淀
支原体检测样本制备：建议送检上清
1.贴壁细胞上清液或细胞沉淀制备
贴壁细胞上清液制备：在无抗生素及其它抑菌或灭菌物质条件下培养 3 天，汇合度达到90%左右时，直接吸取 1.0ml 细胞培养上清液移至 1.5ml 离心管中。
贴壁细胞沉淀制备：上述（a）贴壁细胞收取完上清后，加入1ml PBS，使用细胞刮刮取细胞，吸取转移至1.5ml离心管，12000rpm离心沉淀细胞。（如果使用胰酶消化细胞，需要10ml PBS洗三遍后，1ml PBS重悬沉淀，然后转移至1.5ml离心管，12000rpm离心获得细胞沉淀。）
2.悬浮细胞上清液或细胞沉淀制备
悬浮细胞上清液制备：在无抗生素及其它抑菌或灭菌物质条件下培养 3 天，500g离心5min，直接吸取 1.0ml 细胞培养上清液移至 2ml 离心管中。
悬浮细胞沉淀制备：上述（c）吸取上清液后的沉淀，加入1ml PBS重悬沉淀，然后转移至1.5ml离心管，12000rpm离心10min，弃上清，获得细胞沉淀。
原创作者：上海瓦兰生物科技有限公司
