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技术文章

TaqMan探针作为阻断剂参与突变基因的PCR扩增和DNA熔解分析

点击次数：4863 发布时间：2017/3/28 14:50:26

含TaqMan探针的非对称PCR以及DNA熔解分析被应用于突变检测，可有效用于临床诊断。该方法简单、成本低，在一个封闭的离心管中进行，可最大限度的减少反应时间，减轻工作量，以及避免样品间的交叉污染。尽管DNA熔解分析比DNA常规测序更加灵敏（两者的突变检测阈值分别为～5%和15%～20%），但相比与那些工作量大且昂贵的生物技术，如焦磷酸测序和微滴型数字PCR而言，其灵敏度相差甚远。Irina V. Botezatu等俄国科学家证明，在一些特殊的非对称PCR情况下，TaqMan探针可作为阻断剂，能够优先阻断野生型等位基因的扩增，从而导致突变型等位基因的大量扩增。因此，使得BRAF和NRAS突变基因的检测灵敏度增加了10倍。

原文：

Irina V. Botezatu, Irina O. Panchuk, Anna M. Stroganova, et al. TaqMan probes as blocking agents for enriched PCR amplification ａnd DNA melting analysis of mutant genes. BioTechniques 62:62-68 （February 2017）.

TaqMan探针

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