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技术文章
PCR，qPCR，dPCR分别是什么?有什么区别?
点击次数：9 发布时间：2026/10/30 13:14:01
PCR，qPCR，dPCR分别是什么?有什么区别?
PCR是代核酸扩增基础技术，qPCR是第二代实时荧光定量技术，dPCR是第三代绝对定量技术，三者在检测逻辑、定量能力和适用场景上存在明确代际差异。
定义与原理
常规PCR（聚合酶链式反应）：通过变性-退火-延伸的温度循环，在体外指数级扩增目标DN段，属于终点定性检测，扩增完成后通过琼脂糖凝胶电泳观察产物条带，仅能判断目标序列是否存在。
qPCR（实时荧光定量PCR）：在PCR体系中加入SYBRGreen荧光染料或TaqMan特异性探针，在扩增过程中实时监测荧光信号累积，通过Ct值（荧光达到阈值的循环数）结合标准曲线，推算起始模板的相对/绝对浓度，实现从定性到定量的跨越。
dPCR（数字PCR）：将原始样本分割为数万至数十万个独立微反应单元（微滴或微孔），每个单元仅含0或1个目标核酸分子，独立完成扩增后统计阳性单元的比例，基于泊松分布直接计算靶分子的绝对拷贝数，无需依赖标准曲线，是第三代PCR技术。
维度差异对比
| 对比维度 | 常规PCR | qPCR | dPCR |
| 技术代际 | 代 | 第二代 | 第三代 |
| 定量能力 | 仅定性，无法定量 | 相对定量/依赖标准曲线的绝对定量 | 无需标准曲线的直接绝对定量 |
| 检测时机 | 扩增结束后开管电泳检测 | 扩增全程实时闭管监测荧光 | 扩增完成后统计阳性反应单元 |
| 指标 | 电泳条带有无/亮度 | Ct值 | 阳性微滴/微孔的统计比例 |
| 灵敏度 | 仅能检测中等以上丰度样本 | 可检测低丰度样本 | 单分子级检测，最低可识别0.001%的稀有突变 |
| 操作污染风险 | 开管电泳，高污染 | 全程闭管，低污染 | 全封闭体系，极低污染 |
对比维度常规PCRqPCRdPCR
技术代际代第二代第三代
定量能力仅定性，无法定量相对定量/依赖标准曲线的绝对定量无需标准曲线的直接绝对定量
检测时机扩增结束后开管电泳检测扩增全程实时闭管监测荧光扩增完成后统计阳性反应单元
核心指标电泳条带有无/亮度Ct值阳性微滴/微孔的统计比例
灵敏度仅能检测中等以上丰度样本可检测低丰度样本单分子级检测，最低可识别0.001%的稀有突变
操作污染风险开管电泳，高污染全程闭管，低污染全封闭体系，极低污染
应用场景
常规PCR：适用于基因克隆、DN段获取、普通病原体定性筛查等仅需判断“有无”的基础实验，成本低、操作门槛低。
qPCR：是当前核酸定量的“黄准”，广泛用于基因表达相对定量、常规病毒载量测定、转基因成分筛查、临床大规模病原核酸检测，通量高、检测速度快。
dPCR：聚焦高难度检测场景，包括肿瘤液体活检ctDNA稀有突变检测、拷贝数变异分析、二代测序结果验证、复杂背景下低拷贝核酸检测、单细胞基因表达分析等，结果精度和抗干扰能力远高于前两代技术。
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