摘要
以二氯甲烷为溶剂，提取奶粉中的香兰素和乙基香兰素，经分散固相萃 取方法净化后，用Trace1310气相色谱仪测定，外标法定量，线性良好，回收 率和重现性均满足分析要求。
引言
香兰素（vanillin），又叫香草醛，学名3-甲氧基-4-羟基ben甲醛；乙基 香兰素（ethyl vanillin），学名3-乙氧基-4-羟基ben甲醛。两者均为白色或微 黄色结晶粉末，微溶于水，具有香荚兰香气及浓郁的奶香，是重要的食品添 加剂，广泛用作食品、饮料以及日化用品等的增香剂。但是，大剂量使用香 兰素等香料将有害健康。根据《食品安全国家标准食品添加剂使用规定》 GB2760-2011要求，凡使用范围涵盖0至6个月婴幼儿配方食品不得添加任何 食用香料。2012年7月有报道称，几大洋品牌的I段奶粉被检出添加了国家禁 止的香兰素，因此需要建立相关检测方法对奶粉中的香兰素进行检测。
目前关于香兰素和乙基香兰素的测定方法主要有分光光度法、电化学 法、高效液相色谱法、气相色谱和气质联用法，由于HPLC法对样品净化程度 要求不高，因此样品预处理方面的研究较少。本方法采用二氯甲烷提取，分 散固相萃取净化，建立同时测定婴幼儿配方奶粉中香兰素和乙基香兰素含量 的气相色谱法。
实验部分
主要仪器设备与试剂
仪器：气相色谱仪，Trace 1310，美国ThermoFisher。
试剂：二氯甲烷，色谱纯；氯化钠，分析纯； Cleanert C18固体吸附剂；香兰素和乙基香兰素标准品。
样品前处理方法
称取5 g奶粉（精确到0.01 g）于100 mL容量瓶中， 加入20 mL水，振荡，使成为均匀奶液，加水定容至刻 度，摇匀。用移液管移取5 mL奶液于15 mL离心管中，加 入2 g NaCl，5 mL二氯甲烷，盖好盖子振荡提取5 min，静 置2 min，然后以10000 rpm离心5 min，小心全部移取下 层有机层，过无水硫酸钠后，定容至5 mL，加入150 mg C18吸附剂，涡旋1 min，静置后吸取上层清液过0.2 µm滤 膜，待气相色谱仪测定。
样品的测定
上述得到的样品溶液直接进样，气相色谱仪检测，外 标法定量。仪器参数设置见表1.
结果与讨论
标准样品的色谱图和线性
标准样品中香兰素和乙基香兰素的色谱图如图1 所示。用标准样品配制成浓度分别为1 µg/mL, 2.5 µg/ mL,10 µg/mL, 35 µg/mL, 50 µg/mL的系列标准工作液， 进样1 µL，然后按照以上所述的测定方法进行GC-FID测 定，以标准物质的浓度为横坐标，以各标准物质的峰面积 为纵坐标，绘制标准曲线，得到香兰素和乙基香兰素的标 准工作曲线如图2。香兰素和乙基香兰素的相关系数分别 为0.9980和0.9991。
方法的精密度和回收率
对香兰素和乙基香兰素的1 µg/mL，2 µg/mL，10 µg/ mL三个水平加标样品分别进行了3次测定，平均回收 率和相对标准偏差列于表2中。样品加标的色谱图见图 3。选择1 µg/mL的标准溶液，以噪声的3倍计算，本方 法中香兰素和乙基香兰素的检测限分别为0.33 µg/mL和 0.25 µg/mL。
对市售4个奶粉样品中香兰素和乙基香兰素的测定
按上述前处理方法测定了4个奶粉样品中的香兰素 和乙基香兰素含量，其中样品1为I段奶粉，为禁止添加 香兰素和乙基香兰素。样品2、3、4为III段奶粉，可以添 加香兰素和乙基香兰素，允许添加量为5 mg/100 mL， 即50 µg/mL。其中100 mL以即食食品计，即冲调好的 奶液，按照奶粉冲调说明一般为每100 mL水加入14 g奶 粉。样品中的香兰素和乙基香兰素的含量采用外标法定 量，配制一系列标准工作溶液，以浓度为横坐标，峰面 积为纵坐标绘制标准曲线，定量结果按公式（1）换算为 奶液中的含量，列于表3中。
C=Ci×Vi×14 g Ms×100 mL
其中：C 为按照冲调说明冲调好的奶液中的含量， 单位为 µg/mL Ci 为经前处理后最终定容液中的含量，单位 为 µg/mL Vi 为前处理后最终定容液的体积，单位为mL Ms 为最终定容液中包含的奶粉的质量，单位 为g，本方法中为0.25 g
结论
建立了婴幼儿配方奶粉中香兰素和乙基香兰素的气 相色谱测定方法。本方法步骤简单、快捷，精密度高， 具有较好的分离度，杂质干扰少，测定结果准确可靠， 灵敏度高，是测定婴幼儿配方奶粉中香兰素、乙基香兰 素的较好的方法。
