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技术文章
猪弓形虫IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
点击次数：3016 发布时间：2019/12/12 13:28:19
猪弓形虫IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
使用说明书
【产品名称】
通用名：猪弓形虫IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Porcine Toxoplasma(ELISA)
【包装规格】 96T×1/盒、96T×2/盒
【预期用途】 猪弓形虫病是由弓形虫（Toxoplasma，TOX）引起的一种原虫病，又称弓形体病。弓形虫病是一种人畜共患病，宿主的种类十分广泛，人和动物的感染率都很高。
本试剂盒用于检测猪血清或血浆中弓形虫特异性抗体，评估猪场弓形虫感染状况。
【原 理】
本试剂盒系由预包被弓形虫（TOX）重组抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清、血浆样本中弓形虫抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有弓形虫抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有弓形虫抗体。
【试剂盒组成】
| 序号 | 名称 | 规格（96T×1） | 规格（96T×2） |
| 1. | 酶标板 | 96T×1 | 96T×2 |
| 2. | 酶标记物 (红盖) | 11ml×1 | 11ml×2 |
| 3. | 样品稀释液 (黄盖) | 50ml×1 | 50ml×1 |
| 4. | 20X浓缩洗涤液 | 40ml×1 | 40ml×1 |
| 5. | 底物液A (白盖) | 6ml×1 | 11ml×1 |
| 6. | 底物液B (黑盖) | 6ml×1 | 11ml×1 |
| 7. | 终止液 (黄盖) | 6ml×1 | 11ml×1 |
| 8. | 阳性对照 (红盖) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
| 9. | 阴性对照 (绿盖) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
| 10. | 盖板膜 | 1张 | 2张 |
| 11. | 自封袋 | 1个 | 1个 |
| 12. | 说明书 | 1份 | 1份 |
【储存及有效期】 于2～8℃避光保存，有效期为12个月。
包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。
【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。
【样品准备】
1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。
2.用样品稀释液将待检血清按100倍稀释（如2μl血清加入198μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。
3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。
【检验方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
3.空白对照孔加样品稀释液100μl；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。
4.混匀，置37℃反应30分钟。
5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。
6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。置37℃反应30分钟。
7.洗涤，同步骤5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl，混匀，用空白孔调零，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。
【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照≤0.20，阳性对照≥0.5。
【检验结果的解释】
1.C.O（临界值）=2.1×阴性对照均值（阴性对照均值小于0.1时按0.1计算）；
3.样品值＞C.O为阳性，样品值≤C.O为阴性。
【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性检测猪血清或血浆中弓形虫IgG抗体。
【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
8.不同批号试剂组分不得混用。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
