企业档案
会员类型：旗舰版
已获得阿仪网信誉 等级评定
(0 -40)基础信誉积累，可浏览访问
(41-90)良好信誉积累，可接洽商谈
(91+ )优质信誉积累，可持续信赖
阿仪网旗舰版会员：9年
工商认证 【已认证】
最后认证时间：
注册号： 【已认证】
法人代表： 【已认证】
参观次数：6521183
手机网站：http://wap.app17.com/c137908/
旗舰版网址：http://www.yajiml.com
技术文章
谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px试剂盒
点击次数：3237 发布时间：2022/5/7 9:06:47
分光光度法50管/48样 注 意：正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： GSH-Px是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，从而保护生物膜免受ROS的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。 GSH-Px催化有机过氧化物氧化GSH，产生GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化NADPH还原GSSG，再生GSH，同时NADPH氧化生成NADP+；NADPH在340 nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340 nm光吸收减少速率来计算GSH-Px活性。 紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水。 试剂一：液体100mL×1瓶，室温保存。 试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。 试剂三：液体20μL×1支，-20℃保存。 试剂四：液体200μL×1瓶，4℃保存。 1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。 2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3，间隔7，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 3. 血清等液体：直接测定。 测定操作： 1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。 2. 混合试剂在25℃或者37℃（哺乳动物）水浴中预热30min。 3. 混合试剂配制：临用，在试剂二中加入试剂一40 mL，充分震荡溶解后加入全部试剂三，混匀。（注意：必须现配现用，当天使用完） 4.试剂四的稀释： 吸取21.5μL试剂四，加入5mL水充分混匀，临用配制，配制好的试剂当天使用。 5. 测定管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、800μL预热的混合试剂、100μL稀释后的试剂四， 迅速混匀后于340nm处测定第30 s和第210s的吸光值，分别记为A1和A2，△A= A1﹣A2。 计算公式： (1). 按蛋白浓度计算 GSH-Px活力单位定义：一定温度中，每mg蛋白每分钟催化1nmol NADPH氧化为1个酶活单位。 GSH-Px (nmol/min/mg prot)=[△A÷ε÷d×V反总×109]÷（Cpr×V样）÷T =536×△A÷Cpr (2). 按样本质量计算 GSH-Px活力单位定义：一定温度中，每g样本每分钟催化1nmol NADPH氧化为1个酶活单位。 GSH-Px (nmol/min/g)=[△A÷ε÷d×V反总×109]÷(W×V样÷V样总)÷T =536×△A÷W （3）按细胞数量计算 活性单位定义：一定温度中，每104个细胞每分钟催化1nmol NADPH氧化为1个酶活单位。 GSH-Px (nmol/min/104 cell)= [△A÷ε÷d×V反总×109]÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T =536×△A÷细胞数量 （4）按液体体积计算 活性单位定义：一定温度中，每毫升液体每分钟催化1nmol NADPH氧化为1个酶活单位。 GSH-Px (nmol/min/mL)=[△A÷ε÷d×V反总×109]÷V样÷T =536×△A ε：NADPH摩尔消光系数6.22×103L/mol/cm；V反总：反应体系总体积，1000μL=0.001 L；106：1mol=1×106μmol； Cpr：上清液蛋白浓度（mg/mL）；V样：加入反应体系中上清液体积，100μL =0.1 mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W，样本质量，g；T：反应时间，3 min。 注意事项： （1）样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力； （2）混合试剂和底物液须临用配制，配完后置于冰上，当天使用完； （3）测定过程操作须迅速； （4）细胞中GSH-Px活性测定时，细胞数目须在300万-500万之间，细胞中GSH-Px的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞。
测定原理：
自备仪器和用品：
试剂组成和配置：
粗酶液提取：
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
