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技术文章
单宁含量试剂盒
点击次数：3359 发布时间：2022/4/4 8:35:32
分光光度法50管/48样 注 意：正式测定取2-3个预期差异较大的样本做预测定 测定意义： 单宁是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物，又称植物多酚。具有独特的化学性质和多种生理活性，如能与蛋白质、生物碱、多糖结合；能与多种金属离子发生络合或静电作用；具有止血、抑制微生物、抗过敏、抗突变、抗肿瘤、抗衰老等生理活性。 测定原理： 单宁在碱性环境下与磷钼酸反应，生成蓝色化合物，在760nm处有大吸收峰。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。 试剂的组成和配制： 试剂一：液体10 mL× 1瓶，4℃保存； 试剂二：液体8 mL × 1瓶，4℃保存； 单宁的提取： 按照组织质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL蒸馏水），充分匀浆后转移到EP管中，80℃水浴提取30min， 8000 g，25℃离心10 min，取上清液待测。 测定步骤： 1、分光光度计预热30min以上，调节波长至760nm，蒸馏水调零；试剂一和试剂二37℃预热10min以上； 2、操作表： 试剂名称（µL） 对照管 测定管 样本 25 蒸馏水 675 650 试剂一 175 175 混匀，室温静置5min 试剂二 150 150 混匀，室温静置30min，760nm处读取吸光值A，ΔA=A测定-A对照，对照管只要做一管。 单宁含量计算： 1、标准条件下测定的回归方程为y = 1.6418x +0.0134；x为标准品浓度(mg/mL)，y为ΔA(A测定-A对照)。 2、按样本鲜重计算： 单宁含量（mg /g鲜重）= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷（W×V1÷V2）=0.609×(ΔA-0.0134) ÷W。 3、按样本蛋白浓度计算： 单宁含量(mg/mg prot)= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷(V1×Cpr)=0.609×(ΔA-0.0134) ÷Cpr。 V1：加入样本体积，0.025mL；V2：加入提取液体积，1mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。 注意： 1、 ΔA控制在0.02-0.8范围内，若ΔA大于0.8，将样本提取上清液用蒸馏水稀释10倍后检测，计算公式中乘以相应稀释倍数。 2、 标准曲线线性范围为：0.025mg/mL-0.5mg/mL。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
