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技术文章
超氧阴离子清除能力试剂盒
点击次数：3327 发布时间：2022/4/4 8:30:34
注 意：正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： 超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基，可攻击生物大分子，如脂质、蛋白质、核酸和聚不饱和脂肪酸等，使其交链或者断裂，引起细胞结构和功能的破坏，与机体衰老和病变有很密切的关系，清除超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。 测定原理： AP-TEMED系统产生超氧阴离子，与盐酸羟胺反应生成NO2－，NO2－与对氨基苯磺酸和α－萘胺的作用生成红色的偶氮化合物，在530nm处有特征吸收峰，样品对超氧阴离子的清除能力与530nm的吸光值呈负相关。 自备实验用品及仪器： 天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。 试剂组成和配制： 提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。 试剂一：液体3mL×1瓶，4℃避光保存。 试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用加12mL蒸馏水充分溶解。 试剂三：液体15mL×1瓶，4℃保存。 试剂四：液体15mL×1瓶，4℃避光保存。 试剂五：液体15mL×1瓶，4℃避光保存。 样品处理： 1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。 2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3，间隔7，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。 3. 培养液或其它液体：直接检测。 4. 粉剂药物可配制成相同浓度，比如1mg/mL。 测定操作： 对照管 测定管 试剂一（μL） 40 40 试剂二（μL） 160 160 H2O（μL） 100 充分混匀，25℃反应1min 样品（μL） 100 试剂三（μL） 200 200 充分混匀，37℃反应30min 试剂四（μL） 200 200 试剂五（μL） 200 200 充分混匀，37℃显色20min，于1mL玻璃比色皿，在530nm处测定对照管和测定管的吸光值，分别记为A对照管和A测定管。 注意：对照管只需测定一次。 计算公式： 超氧阴离子清除率 I%= 注意事项： 试剂一4℃可保存2个月，配制好的试剂二4℃可保存一周，建议实验配制，并尽快使用。 1. 样品处理完后立即进行测定，或者低温保存不超过24小时。
分光光度法50管/48样
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
