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技术文章
细胞划痕实验
点击次数：3923 发布时间：2018/11/8 8:59:43
实验方法原理创伤愈合实验是一种简单、廉价的方法，也是最早发展起来的研究定向细胞在体外迁移的方法之一。该方法模拟了细胞在体内愈合过程中的迁移过程。基本步骤包括在细胞单层中创建一个“伤口”，在细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像以关闭伤口，以及比较图像以确定细胞迁移速率。
实验材料细胞样品
试剂、试剂盒无血清培养基PBS
仪器、耗材6孔板marker笔直尺枪头
实验步骤
一.准备：
所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min（超净台内）
二.流程：
1.先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。
2.在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。
3.第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。
4.用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。
5.放入37度5%CO2培养箱，培养。按0，6，12，24小时取样，拍照。
下面是照片，细胞NIH3T3
0h
注意事项
1.划痕法测量适用的细胞范围较小，一般只适用于上皮细胞，纤维样细胞。
2.虽然无血清培养可以忽略细胞增殖的影响，但是由于细胞内信号传导系统整体性的下调节，细胞迁移的速度也会慢很多
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
