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技术文章
人ASS1酶联免疫分析的详细步骤
点击次数：448 发布时间：2026/7/16 11:58:51
人ASS1酶联免疫分析的试剂准备、样本前处理、操作注意事项等相关背景，以下是该实验的完整详细操作步骤：
一、实验前准备
试剂平衡：将2-8℃保存的人ASS1 ELISA试剂盒取出，室温（20-25℃）平衡20分钟，若20×浓缩洗涤液有结晶，37℃水浴加热至完全溶解。
耗材设备核验：确认450nm波长酶标仪、37℃恒温箱、对应量程高精度移液器及枪头、吸水纸等齐备。
试剂配制：按1:20比例用蒸馏水稀释20×洗涤缓冲液，现配现用，充分混匀。
样本预处理：待检测样本室温充分解冻，10000转短暂离心去除沉淀，避免杂质干扰。
二、加样操作
从铝箔袋中取出所需数量的酶标板条，剩余板条放回自封袋密封，2-8℃保存。
设置空白孔、标准品孔、待测样本孔：标准品孔各加50μL不同浓度的ASS1标准品；样本孔先加10μL待测样本，再加40μL样本稀释液（样本最终稀释倍数为5倍）；空白孔不加任何液体。
除空白孔外，所有孔中加入100μL HRP标记的ASS1检测抗体，用封板膜完全封住反应孔，避免液体蒸发。
三、孵育与洗涤
将酶标板放入37℃恒温箱，准确温育60分钟，全程避免板条震动、温度波动。
揭去封板膜，甩尽孔内所有液体，在吸水纸上拍干，每孔加满稀释后的洗涤液，静置1分钟后弃去，重复该洗板步骤5次，一次充分拍干孔内残留液体。
四、显色与终止
每孔依次加入底物A、底物B各50μL，轻轻晃动混匀，37℃条件下避光孵育15分钟，此时标准品孔会呈现由深到浅的蓝色梯度。
每孔加入50μL终止液，轻轻混匀，蓝色液体即刻转为黄色，终止反应需确保每孔加液量一致。
五、结果测定与分析
加入终止液后15分钟内，使用酶标仪以空白孔调零，在450nm波长下读取所有孔的吸光度（OD值）。
在Excel中以标准品浓度为横坐标、对应OD值为纵坐标，绘制标准线性回归曲线，得到回归方程，将待测样本的OD值代入方程，计算得到的结果乘以5倍稀释倍数，即为样本中ASS1的实际浓度。
原创作者：上海谷研实业有限公司
