企业档案
会员类型：旗舰版
已获得阿仪网信誉 等级评定
(0 -40)基础信誉积累，可浏览访问
(41-90)良好信誉积累，可接洽商谈
(91+ )优质信誉积累，可持续信赖
阿仪网旗舰版会员：10年
工商认证 【已认证】
最后认证时间：
注册号： 【已认证】
法人代表： 【已认证】
参观次数：6541478
技术文章
分享试剂盒提取细胞DNA的实验方法
点击次数：4155 发布时间：2018/2/1 10:17:53
一、细胞DNA的提取（试剂盒）
1、 组织样品处理与消化
① 将带有培养基的样品用PBS清洗干净8000rpm/1min离心，倒掉上清
② 加PBS200ul振荡摇匀使之样品成为单个细胞的悬浊液
③ 加200ul Binding Buffer，40ul蛋白酶K 混合均匀放入70℃水浴锅内消化10 分钟。
2、 DNA提取
① 加异丙醇100ul 混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g一分钟。
② 倒掉底液，加500ul组织抑制剂Inhibitor Removal 然后离心倒掉底液
③ 加洗液washing buffer500ul离心（洗液加两次）
④ 预热双蒸水（37℃）然后将洗好的柱体下部分丢掉，换新的离心管加入双蒸水 100ul溶解10分钟离心保留底液放-20℃保存。（注：最好溶解两次）。
二、分光密度仪的操作方法及样品的测试结果
1、光密度（optical delnsity）简称OD
2、操作示意图 电源开关 → 主界面→ 按1键 → 核酸 dsDNA
3、检测
①首先做一个空白对照，将1ul的水滴到镜头上盖上盖子，按一下蓝色键
②空白对照做好后依次检测其他样品，需要记录A260/A280的比值及浓度值
三、对浓度比较低的DNA溶液进行处理
1、处理方法（乙醇沉淀-浓缩）
①实验材料的准备
2ml圆底离心管；无水乙醇；70%无水乙醇；醋酸钠（NaAc PH5.2）
②操作方法
a 根据DNA溶液的体积判断加1/10体积的NaAc 和2倍体积的无水乙醇加好之后颠倒混匀放在-20℃沉淀（10min—16h或者更长时间均可）
b 将沉淀好的样品离心（12000xg10分钟）注意离心的时候离心管的管耳一定要朝外，离心后倒掉上清，取1ml 70%无水乙醇轻轻加入离心管中清洗之后倒掉洗液可清晰看到DNA片状物然后晾干。
c 根据需要将晾干后的DNA用双蒸水溶解。溶解的时候注意加双蒸水要沿着管耳加入小滴然后轻轻转动离心管使水滴随着管壁转动充分溶解DNA，将溶解好的DNA放入-20℃保存。
2、测OD上同（二—3）
醋酸甲羟孕酮相关物质A标准品 25mg
地尔硫卓相关物质A标准品 25mg
碘克沙醇相关物质C标准品 25mg
非索非那定相关物质B标准品 25mg
呋喃妥因相关物质A标准品 25mg
氟伐他汀用于系统适用性标准品 25mg
氟替卡松丙酸酯分离度用混合物标准品 25mg
氟替卡松丙酸酯系统适用性用混合物标准品 25mg
甘罗溴铵红霉素同分异构体标准品 25mg
甘罗溴铵相关物质C标准品 25mg
原创作者：上海谷研实业有限公司
