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如何检测GFP、GFP、YFP、EYFP、CFP抗体？
点击次数：4731 发布时间：2018/11/26 10:32:08
检测GFP、EGFP、YFP、EYFP、CFP的GFP抗体
GFP是绿色萤光蛋白（Green Fluorescent Protein）的简称，由238个氨基酸残基组成。GFP蛋白质最早是由下村脩等人在1962年在一种学名Aequorea victoria的水母中发现。其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色萤光。GFP或其突变体EGFP标签系统等被广泛用于基因表达效率的检测，以及和目的蛋白融合表达用于检测目的蛋白的表达和分布。我们都知道GFP抗体能应用于GFP的表达检测、纯化以及定位分析。那么该如何检测GFP其他的一些突变体，如EGFP、YFP、EYFP、CFP的表达和定位呢？
我们来看一下GFP标签与其它突变体标签的关系。YFP（Yellow Fluorescent Protein）是黄色荧光蛋白，其序列与GFP基本相同。YFP就是把Thr203以Tyr取代，这样的GFP不发出绿色荧光，而发出较长波长的黄色荧光，也就是YFP。因此两者最大的区别则是发射波长了，在其他序列上没有区别。而EGFP是增强型的GFP，发生了双氨基酸取代，Leu（亮氨酸）取代GFP上的Phe64（苯丙氨酸），Thr（苏氨酸）取代了GFP上的Ser65（丝氨酸），与GFP相比，具有更强更稳定的绿色荧光。CFP（Cyan Fluorescent Protein）与此类似，也是GFP第66位上的酪氨酸Tyr被色氨酸（Thr）所取代的结果，发蓝色荧光。由此可见，GFP标签与其它突变体GFP、YFP、EYFP、CFP的序列非常的类似，只有1-2个氨基酸残基的变化。
EarthOx GFP标签抗体用于IF实验 EarthOx GFP标签抗体用于WB实验，1道为阴性对照，2道为1:1000倍稀释
我们先看一下EarthOx的单克隆GFP抗体——Anti-GFP Tag Monoclonal Antibody [GF28R]，其免疫原是KLH偶联的水母GFP蛋白的N末端多肽，由于EGFP、YFP、EYFP、CFP得N末端序列与GFP几乎完全一致，因此从免疫原上来说，GFP与EGFP、YFP、EYFP、CFP没有区别。更重要的是，EarthOx对于该单克隆抗体还进行了明确的验证试验，试验也表明该Anti-GFP Tag Monoclonal Antibody均能与GFP、YFP、EYFP、CFP等突变体有交叉反应，可以用于GFP、YFP、EYFP、CFP等荧光蛋白的表达定量、定位分析和检测。EarthOx该GFP标签抗体的另一个优势是，可用于的试验类型很多，除了基本的WB、ELISA试验外，还可以用于免疫细胞化学、免疫荧光（ICC/IF）、免疫共沉淀（IP）等。该抗体的效价很高，EarthOx的推荐WB起始稀释比率为1:1000，实际应用于中还能有更优异的表现。因此，EarthOx的Anti-GFP Tag Monoclonal Antibody [GF28R]不仅可以用于GFP，还能应用于GFP其他的一些突变体，如EGFP、YFP、EYFP、CFP的表达和定位等实验。
原创作者：上海岑特生物科技有限公司
