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发布时间:2021/3/25 10:55:32关注度:2989
测定意义: 淀粉酶负责水解淀粉,主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。
测定原理:Fe2+与菲洛嗪反应形成紫红色化合物,在562nm处有特征吸收峰。碱性条件下,血清转铁蛋白可以与Fe3+结合,剩余未结合的Fe3+可以被还原成Fe2+,此时吸光度A1与未结合Fe3+数量正相关;酸化后,转铁蛋白结合的Fe3+释放,并且进步被还原成Fe2+ ,此时吸光度A2与总Fe3+数量正相关。A2减A42与TIBC浓度呈正比。
需要的仪器,耗材: 可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵和蒸馏水。
样本处理
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)1:5-10 的比例(建议称取约 0.1 g 组织,加提取液 1 mL), 冰上充分研磨匀浆,8000 g,4℃,离心 10 min,取上清液置于冰上待测。 2. 细菌、细胞:按照细胞数量(10 4个):提取液体积(mL)为 500-1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声破碎细胞(功率 300w,超声 3s,间隔 7s,总时间 3 min);然后 8000 g,4℃,离心 10min, 取上清置于冰上待测。 3. 血清等液体:直接检测。
原创作者:上海仁捷生物科技有限公司
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