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HCC-94 [HCC941122;HCC 94]细胞株
点击次数:500发布时间:2016/10/26
更新日期:2021/11/4 22:26:39
生 产 地:中国大陆
产品型号:
详细内容
二、使用方法
客户收到HCC-94 [HCC941122;HCC 94]细胞株后,请按照以下方法进行操作。
1. 收到细胞,请查看瓶子是否有破裂,培养基是否漏出,是否浑浊,如有请尽快和我们联系。
2. 如包装完好,取出25cm2培养瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,在显微镜下观察细胞形态是否正常,细胞的贴壁情况以及细胞密度,然后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置2-3小时,以稳定细胞状态。
3. 细胞状态稳定后,弃除培养瓶中大部分液体,只剩5-10ml左右培养液继续培养就可以了,超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。
4. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基,用PBS 2-3ml清洗细胞一次;
2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1.5ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后吸弃消化液,再加入完全培养液终止消化;
3) 用吸管轻轻吹打混匀,按1:2等适当的比例进行接种传代,然后补充新鲜的完全培养基至5ml,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4) 待细胞完全贴壁后,培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。
三、注意事项
1. 在HCC-94 [HCC941122;HCC 94]细胞株培养过程中,请注意保持无菌操作;
2. 传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态;
3. HCC-94 [HCC941122;HCC 94]细胞株只可用于科研。
四、冷冻保存细胞之方法
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃(30-60 分钟)→-20℃( 30 分钟) → -80℃(16-18 小时或隔夜)→ 液氮罐长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80 ℃以下, 再放入液氮中长期储存。注意:-20℃不可超过1 小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
五、细胞复苏
取出冷冻管后,须立即放入37℃水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其在1-2 分钟内大部分融化,特别注意,需残留一小块冰块,就可拿到超净工作台操作细胞,用75%消毒冻存管,用新鲜培养基将细胞转移至培养瓶。另外冷冻管由液氮桶中取出解冻时,必须注意安全,预防冷冻管之爆裂。
刚收到细胞时,胎牛血清可以用15%培养两三天,利于细胞尽快恢复状态,细胞稳定后
再调回10%即可。www.elisakits.cn
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