除了竞争ELISA，还有哪些ELISA方法？它们的标准曲线有何不同？

夹心 ELISA 适合大分子抗原，需要一对识别不同表位的配对抗体，不能用于小分子半抗原。横坐标是标准抗原浓度，一般取对数，纵坐标是扣除本底之后的原始信号，不用换算成 B/B0，曲线是向上的 S 形，用四参数拟合，得到的是半最大效应浓度 EC50，信号和目标物浓度呈正相关，动态范围通常更宽。

直接 ELISA 在板上包被抗原，使用酶标记的一抗，多用于包被筛选和抗原纯度鉴定，很少用于常规样本定量。定量时横坐标为标准抗原浓度并取对数，纵坐标是扣空白后的信号，同样是上升的 S 型曲线，用四参数拟合得到 EC50，缺点是缺少二抗带来的信号放大，信噪比一般，大多只做半定量使用。

间接 ELISA 最常用来检测血清中的抗体。如果是定量模式，横坐标是标准抗体浓度，取对数，纵坐标是扣本底后的信号，曲线向上，四参数拟合得到 EC50。如果是测滴度，横坐标换成抗体稀释倍数，一般只报告滴度，不换算成质量浓度，这种稀释序列不能算作真正用于浓度换算的标准曲线。

竞争 ELISA 多用于小分子半抗原，横坐标是游离标准抗原浓度，取对数，纵坐标常用 B/B0 或者抑制率，曲线是向下的 S 形，四参数拟合得到半抑制浓度 IC50，目标物浓度越高，最终检测信号越低。

这几种定量模式都优先采用四参数拟合，不适合直接用线性拟合，只有曲线中间很窄的区段会近似线性。夹心、直接和间接的定量曲线属于增益型，竞争属于抑制型，这是它们最核心的区别。间接 ELISA 的滴度曲线没有已知浓度梯度，只能判断抗体强弱，不能用来计算样本里抗体的质量浓度。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司