如何判断抗体的单体与聚集体占比？

下面按层级整理，优先给出适合你前质控的路线：常规定量准、快速初筛、辅助定性、正交确证，同时写明每一种怎么读结果、坑点，以及和胶体记的关联。

1. SEC‑HPLC（常规，日常定量）

这是单抗可溶性寡聚体的常规质控手段，也是绝大多数实验室用来报单体占比的方法。

原理：按流体力学体积分离，大的聚集体先洗脱，然后二聚、三聚，单体在后，是片段；用 280 nm 紫外峰面积归一化计算：
单体占比 = 单体峰面积 ÷ 全部峰总面积
高分子量聚集体 HMW = 二聚及更高寡聚峰面积之和

适合：可溶性二聚、低阶寡聚；上样量低，重复性好，CV 通常小于 2%。
局限：柱上存在稀释，可逆弱聚可能解离；疏水聚集体容易吸附在填料；剪切也可能诱导新聚集；不能很好捕捉微米级亚可见颗粒；流动相改变会改变平衡态PMC。
适配：如果你只是筛选一批抗体能不能用来偶联纳米金，SEC‑UV 足够；一般推荐单体 ≥95%，HMW 尽量低于 2%。

2. SEC‑MALS（质量确证，更可靠）

在 SEC 后面串联多角度光散射 + RI，不依靠保留时间对标准品，直接给出每个洗脱组分的绝对分子量PMC。
它可以区分：看起来保留时间接近，但究竟是二聚体、还是只是构象拉长的单体；同时给出质量加权的百分比，比单纯 UV 面积更准确。
局限：设备贵，同样继承 SEC 的柱上解离、吸附问题；对于痕量超大颗粒检出不如 DLS。

3. SV‑AUC（沉降速度分析，自由溶液准）

无填料、无色谱稀释，在原配方缓冲液里直接测沉降系数分布，最接近抗体在溶液原生状态，是用来校正 SEC 结果的正交方法PMC。
可以分辨可逆寡聚、区分刚性聚集与构象变体；缺点是通量极低、样品消耗大、维护复杂，一般不作为常规筛查，用于有争议样品的确证。当 SEC 和 DLS 结果打架时，用 AUC 判断真实本底聚集水平。

4. DLS（快速初筛，标记前预检）

测布朗运动得到流体力学直径与 PDI，几分钟、微量样品，非常适合在透析后、上之前快速扫一遍。
关键点：DLS 是强度加权，信号随粒径六次方放大；只要极少量大颗粒，就会把分布带偏，不能直接拿来给出可靠的单体质量百分比，只能做 “预警”。

判读：

单体 IgG 流体直径大约 10 nm；

如果 z‑平均明显变大、PDI 升高，提示存在寡聚 / 大聚；

如果强度分布出现一个几十纳米以上的峰，哪怕面积很小，这批抗体标记纳米金时大概率高背景、容易团聚。

适合批量快速排除坏样品，不适合出具定量单体比例。配套指标：同时测 zeta 电位，也辅助判断胶体稳定性。

5. 电泳类（定性 / 半定量）

Native‑PAGE / Native 毛细管电泳 CE‑SDS（非还原）：native 条件下按流体尺寸迁移，可以直观看到单体条带上方有没有寡聚条带。
缺点：电场、凝胶基质、样品浓缩过程都可能诱导聚集或者解离，只能定性或者半定量；还原 SDS‑PAGE 不能看天然聚集体，它会把非共价聚集体拆开，很多人踩这个坑。微流控芯片蛋白分析可以把这个流程自动化，给出电泳图的峰面积比例。

6. 快速粗筛（无专用色谱时）

浊度 / A320、A340 散射吸收：在 A280 定量浓度同时读长波长；如果 A320/A280 升高，说明有散射颗粒，提示聚集体；只能判断有无，不能精确分单体、二聚比例。

肉眼与浊度：澄清透亮是好；乳光、轻微浑浊、可见絮粒代表已经有大量聚集体，直接放弃标记。

过滤试验：0.22 μm 滤膜，如果过滤前后浓度明显下降、滤膜截留蛋白，说明存在亚可见颗粒。

7. 其它手段

NTA（纳米颗粒追踪分析）专门看亚可见颗粒；CDMS、完整蛋白质谱可以分辨共价交联寡聚；HIC 疏水色谱不直接测聚集，但能检出局部疏水暴露，和容易发生界面聚集的抗体强相关。

一套适合纳米记前的实操流程

先用 DLS + A320 快速预检，把明显不稳定样品筛掉；合格样品上 SEC‑HPLC，拿到单体、二聚、HMW 的定量占比；如果结果临界、或者标记出来本底异常，再用 SEC‑MALS 或者 SV‑AUC 做正交确认。

还要记住一个关键点：同一个抗体在不同缓冲、浓度、冻融历史下聚集占比会变；用来送检的缓冲液就是你后续使用的低离子强度标记缓冲液，不然测出来的比例没有参考价值。可逆寡聚在 SEC 的稀释下解离，会高估单体比例，这也是为什么有的抗体 SEC 很好，一加纳米金就出现异常吸附和高背景。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司