表位肽ELISA实验中，再生板的空白本底测试的异常结果有哪些？

按表位肽再生板的特点，把常见异常、对应的现象以及最可能指向的问题分开，全部是空白本底测试里能观察到的，适合写进质控记录或者方法学验证。

种，整体本底显著高于基线。校正后的空白 OD 明显高于同批次新板空白，也高于裸板空白，复孔之间一致性很好。这种一般是再生洗脱不充分，板上残留上一轮的免疫复合物；也可能是反复再生之后，板表面疏水性质改变，非特异吸附变强。如果只是略高于新板，但稳定，并且不影响最低检测点，属于可监控的偏高；如果高出很多，就是放行失败。

第二种，本底均值偏高，同时复孔 CV 很大。同一块板上各个空白孔数值分散，有的孔很高有的正常。大多是孔间残留不均，部分孔内有沉淀、复合物挂壁，或者洗涤时浸润不一致，短肽很容易在局部聚集。也可能是再生孵育时板内液面不平，洗脱液没有均匀接触所有孔。

第三种，本底随着再生轮次逐轮缓慢上升。单次测试可能还在接受范围内，但每再生一次基线就往上挪一点。代表固相正在累积变性蛋白、聚集肽或者不可逆吸附的复合物，属于板子老化信号，继续复用会慢慢出现曲线漂移、假阳性增加，到达阈值就必须淘汰。

第四种，局部系统性偏高，最典型就是边缘孔本底明显高于中间孔。这不是再生残留，是边缘效应，孵育过程液体蒸发、温度不均造成，经常容易误判成再生失败。如果只有外圈孔异常，内孔空白正常，板子本身的再生是合格的，需要优化孵育环境。

第五种，空白本底本身很高，但只加底物的底物空白正常。说明高背景不是底物自发氧化，而是固相上有物质能够捕获封闭液组分、抗体，或者残留的表位肽。反过来，如果仅仅底物空白就偏高，则是底物失效、污染或者配制存放不当，和板再生无关。

第六种，空白本底正常，但阴性对照同步抬升。空白孔没有额外信号，可是不加目标抗原的阴性对照信号变高。提示不是板上残留抗原抗体，而是抗体本身非特异性吸附变强，或是基质干扰，不能归为再生板空白不合格，但预示后续实验特异性下降。

第七种，本底突然跳变，也就是前一轮再生空白稳定，这一轮一下子升高，没有渐进爬升。属于突发污染或者操作失误，比如洗脱液失效、洗涤液被抗体污染、封闭液变质，或是再生时没有充分洗涤，带入上一轮的孵育液。

第八种，本底很低，但波动极大。空白均值看起来合格，但不同批次再生、不同孵育条件下数值忽高忽低。代表这个板的固相吸附状态已经不稳定，残留时有时无，即使单次合格，也不适合用来做定量检测，重复性无法保证。

还有一个比较特殊的情况，再生之后空白低于新包被空白。这种一般是再生过程把一部分原本松散吸附的游离肽洗掉了，基线下降，本身不算坏结果，但要留意后续低浓度点信号会不会同步下降，避免灵敏度丢失。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司