表位肽竞争ELISA实验中，如何设置再生板的空白本底测试的对照孔？

必设对照一共三组，所有孔都不加入一抗、游离肽和待测样本，封闭、孵育、洗板、显色条件和待测孔完全统一。组是新包被肽空白对照，使用同批次新板正常包被目标表位肽，不经过再生，走完整套本底测试流程，用来获取体系正常的基线。第二组是空板基质对照，只加包被缓冲液，不包任何肽，同样不经再生，用来区分本底来自板与封闭吸附，还是包被肽本身。第三组就是待测再生板空白孔，为已经完成再生、漂洗中和的包被肽孔，设置复孔，是本次质控的检测对象。

溯源辅助对照在板位充足时一并布设，出现异常时用来定位信号来源。无二抗对照取自再生板孔，封闭洗板之后只加入二抗稀释缓冲液，不加二抗，后续正常加底物和终止液，如果这一组吸光度偏高，提示缓冲液或者底物存在自发显色或者污染。游离肽竞争对照同样使用再生板孔，封闭之后加入高浓度游离目标表位肽孵育，再加二抗继续流程，如果信号明显下降，代表本底存在残留的特异性免疫复合物，合格的再生板不会出现这种抑制。经过同等再生处理的无肽对照，只加包被缓冲液不包肽，和待测板经历一样轮次与参数的再生，如果它的本底随再生不断抬升，说明是再生造成固相界面损伤，而不是包被肽的残留。

还有配套的零抑制孔，它不属于空白本底的对照，但属于再生板放行必不可少的质控。零抑制孔在再生板上，加入固定浓度一抗，不添加游离竞争肽，其余操作按照正式实验执行，用来监测最大结合信号，判断固相上有效表位是否丢失，就算空白读数合格，如果最大信号明显下降，这块板也不能用于定量。

如果是生物素链霉亲和素锚定肽的体系，还可以增设只固定链霉亲和素、不加生物素化肽并且同步再生的对照，排查链霉亲和素变性带来的非特异吸附。日常快速放行可以只保留两组基线对照和待测再生孔，一旦空白异常，再单独补充溯源对照。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司